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Oligo 6的使用方法 Oligo 6的使用方法 Oligo 6的使用方法 Oligo 6的使用方法 Real-Time PCR引物设计原则 做Real Time时, 引物与一般PCR的引物,在引物设计上所要求的参数是不同的。引物设计的要求： 1）避免重复碱基，尤其是G 2) Tm=58-60度。3）GC=30-80%. 4）3端最后5个碱基内不能有多于2个的G或C. 5)PCR扩增产物长度： 引物的产物大小不要太大，一般在80-250bp之间都可；80～150 bp最为合适（可以延长至300 bp）。6)引物的退火温度要高，一般要在60度以上；要特别注意避免引物二聚体和非特异性扩增的存在。而且引物设计时应该考虑到引物要有不受基因组DNA污染影响的能力，即引物应该跨外显子，最好是引物能跨外显子的接头区，这样可以更有效的不受基因组DNA污染的影响。 常用生物学软件及网站的使用 分子生物学综合软件： Vector NTI 10.3，分子生物学的综合软件，什么功能几乎都全了。 BioEdit 7，杂七杂八的功能凑在一起的一个分子生物学软件，有些罕见的Vector NTI所没有的功能。 DNAMAN 6，与Vector NTI类似的一个软件，但是图型化上做的很差，集成度和序列的管理功能比Vector NTI差的不是一点点。 常用生物学软件及网站的使用 代谢网络