实验二 孚尔根核染色培训.pptVIP

实验2 洋葱根尖孚尔根染色法 实验目的 实验原理 实验方法 注意事项 实验作业 思考问题 实验目的 掌握孚尔根核染色的方法。 了解孚尔根染色的原理。 实验原理 Na2S2O3+ HCl→→亚硫酸根 亚硫酸根+碱性品红→无色的亚硫酸品红—Schiff试剂 DNA在60℃，1mol/L HCl作用下，核酸中的嘌呤碱很快完全除掉，脱氧核糖中潜在的的醛基获得自由状态，水解条件下形成半缩醛羟基，与Schiff试剂反应，形成紫红色化合物。 孚尔根核染色法是Feulgen和Rossonbek于1924年提出的鉴定细胞中DNA的组织化学方法。其优点是制片清洁、染色体清晰、组织软化好，易于压片。但对小型染色体（如玉米、水稻）效果较差。 实验方法 水洗：把已经固定好的洋葱根尖用50％乙醇和清水分别冲洗, 再把它放入室温的1mol/L HCl中处理2-3min。 将根尖换入60℃预热的HCl，置于恒温水浴中，在60?0.5℃的条件下水解10min。 吸出热HCl，换入室温1mol/L HCl再处理2min，然后水洗2-3次。 吸净水分，加入Schiff试剂，盖上盖子，黑暗条件下染色30min或过夜。 小心倒出Schiff试剂,然后用漂洗液洗3次。 漂洗液配置方法：取10ml10 %亚硫酸氢钠母液，加200ml蒸馏水，再加10ml1NHCL，即成漂洗液，使用前配置。 蒸馏水漂洗后取根尖置于载