实验1 叶绿体分离与荧光分析.docVIP

中 国 海 洋 大 学 实 验 报 告 姓名：常天易 系年级：海洋生命学院2012级 专业：生物科学 科目：分子细胞生物学实验 学号：12050011006 一、实验目的： 、通过对植物叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理和方法 、观察叶绿体的间接荧光，并了解荧光显微镜的使用方法 二、实验原理 　　颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小、形状和密度，也同离心力以及悬浮介质的黏度有关。在一定的离心场中，同一时间内，密度和大小不同的颗粒其沉降速率不同，一次增加离心力和离心时间，就能使非均一悬浮液中的颗粒按其大小。密度的先后分批沉降在离心管的底部分批收集，即可获得各个亚细胞的组分。 叶绿体的分离应该在等渗溶液中进行，以免渗透压影响叶绿体，对其造成损伤。 在荧光显微镜下可以观察叶绿体的自发荧光和间接荧光。 三、实验材料 　　 新鲜菠菜。 　　等渗溶液：0.35mol/L氯化钠溶液， 试剂：0.01%吖啶橙(acridine orange) 四、实验方法 １、叶绿体的分离 选取新鲜的菠菜叶30.0g，放入150ml的等渗溶液中，在组织捣碎机中捣碎3min 选取新鲜的菠菜叶30.0g，放入150ml的等渗溶液中，在组织捣碎机中捣碎3min 取6层纱布将溶液过滤于烧杯中，取滤液4ml在1000r/min下离心2min弃去沉淀 取6层纱布