第八课酶定向进化.ppt

*/169 */169 第四节 酶分子定向进化的应用 */169 酶分子定向进化的应用 酶分子定向进化的特点： 适应面广：P酶、R酶 目的性强：人工控制条件筛选 效果显著：能在短时间内获得自然界需要长时间完成的进化。 */169 一些酶定向进化结果 目标酶 所需功能 方法 结果 实施菌种 卡那霉素核苷基转移酶 热稳定性 定位诱变+选择 在60-50℃酶半衰期增加200倍 耐热脂肪芽孢杆菌 枯草杆菌蛋白酶 作用于有机溶剂 易错PCR+选择 在60％二甲基亚砜中活力增强170倍 枯草杆菌 β-内酰胺酶 作用于新底物 DNA改组+选择 对cefotaxime的抗性增加32000倍 大肠杆菌 对硝基苯酯酶 有机溶剂中的底物特异性和活性 易错PCR+重组 活力增加60-150倍 大肠杆菌 胸苷激酶 第五特异性 基因理疗 交错延伸+选择 活力增加43倍 大肠杆菌 β-半乳糖苷酶 底物特异性 DNA改组+选择 活力增加66倍底物特异性增加1000倍 大肠杆菌 砷酸脱毒途径 砷酸抗性 DNA改组+选择 抗性增加12倍 大肠杆菌 */169 一、提高酶的催化活性 是定向进化的主要目标之一 例如： 1993年陈等人提高枯草杆菌蛋白酶E在有机溶剂中的催化效率（157倍） 1994年Stermer使β-内酰胺酶催化活性提高32000倍 1992年Beaudry等使四膜虫RNA剪切酶提高100倍 *