蔗糖酶专一性试验.ppt

病原菌多基因调控机制研究 蔗糖酶的专一性研究 （P69） 实验目的 通过对酵母蔗糖酶专一性的研究，加深对酶专一性的理解 了解酵母蔗糖酶催化水解何种糖苷键 实验原理 1、酶的专一性 酶的专一性是指一种酶只能对一种底物或一类底物起催化作用，并生成具有确定结构的产物，而对其他底物无催化作用。酶的专一性可分为： 键的专一性：只作用与一定类型的化学键，对键两端的集团无严格要求。如核酶、酯酶等 基团专一性：对键两端或一段的基团具有严格要求，如β-葡萄糖苷酶、转移酶等 绝对专一性：只作用于一种底物 立体异构专一性：旋光异构专一性和几何异构专一性 2、葡萄糖、果糖和半乳糖 D/α L/β 3、淀粉的结构与其水解产物 直链淀粉：200~300个α-葡萄糖以α-1，4糖苷键相连 支链淀粉：由α-1，4糖苷键和α-1，6糖苷键在直链淀粉的基础上，分支而成 还原性：无 水解产物：人体内，在淀粉酶的催化下生成麦芽糖；麦芽糖在麦芽糖酶的催化下，彻底水解成解成葡萄糖。 1 2 3 4 5 6 4、棉籽糖的结构与其水解产物 分子组成：α-半乳糖、 α-葡萄糖和α-呋喃果糖聚合而成 还原性：无 彻底水解产物： α-半乳糖、 α-葡萄糖和α-呋喃果糖 β-1，6糖苷键 → → α-1，2糖苷键 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6 5、蔗糖的结构与其水解产物 分子组成：α-葡萄糖和α-呋喃果糖缩合而成的二糖 还原性：无 彻底水解产物：α-葡萄糖和α- 呋喃果糖 α-1，2糖苷键 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6 6、本尼迪特（Benedict）反应 本尼迪特试剂（班氏试剂）：碱性硫酸铜溶液，具有一定的氧化能力，能与还原性单糖的半缩醛羟基发生氧化还原反应，生成氧化亚铜沉淀，砖红色或黄绿色。 淀粉、蔗糖和棉籽糖都不能反应，而它们的水解产物（如葡萄糖和果糖）能够发生本尼迪特反应。因此，可以利用观察有无颜色沉淀，判定蔗糖酶是否对淀粉、蔗糖和棉籽糖具有水解作用。 实验材料 器材：50和1000μL可调移液枪、试管、水浴锅等。 试剂：（略，见教材） 操作步骤 （1）蔗糖酶液的制备：秤取1g干酵母粉，分次加入7ml水，研磨5min，过滤后，滤液用水稀释三倍（蔗糖酶液），待用。 （2）取7支大试管，标号，按下列表格操作： 混匀后，40oC温育30min，再加入2ml班氏试剂，沸水浴中作用3min，观察各管颜色变化，并作记录。 注意事项： （1）充分研磨酵母 （2）脱脂棉先用蒸馏水浸湿 （3）沸水时间不可过长 思考题： （1）试管5经长时间沸水浴后，颜色可能会变成黄绿色，为什么？ （2）按专一性分，蔗糖酶分类属于何种专一性？ （3）蔗糖酶水解何种糖苷键？ * *