斑节对虾谷氨酰胺合成酶基因的克隆及氨氮胁迫对-上海海洋大学学报.PDF

文章编号：１６７４－５５６６（２０１６）０４－０４９７－１１ ＤＯＩ：１０．１２０２４／ｊｓｏｕ．２０１５０９０１５６０ 斑节对虾谷氨酰胺合成酶基因的克隆及氨氮胁迫对其时空表达的影 响 １，２ １ １ １ １ １ １ 陈劲松 ，周发林 ，江世贵 ，杨其彬 ，马振华 ，邱丽华 ，傅明骏 ， １，２ １ 李运东 ，黄建华 （１．中国水产科学研究院南海水产研究所 农业部南海渔业资源开发利用重点实验室，广东 广州　５１０３００；２．上海海洋 大学 水产与生命学院，上海　２０１３０６） 摘　要：根据本实验室构建的斑节对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｍｏｎｏｄｏｎ）ｃＤＮＡ文库得到的ＥＳＴ序列，利用ＲＡＣＥ技术获得 了斑节对虾谷氨酰胺合成酶基因（ＰｍＧＳ）的ｃＤＮＡ全长序列，进行了相关生物信息学分析，在此基础上采用荧 光定量的方法研究了ＰｍＧＳ基因在斑节对虾不同组织、氨氮胁迫过程中差异表达情况。该序列全长 １４２０ ｂｐ，开放阅读框（ＯＲＦ）为１０８６ｂｐ，３′非编码区（ＵＴＲ）为２９４ｂｐ，包括含有２７个碱基的ｐｏｌｙ（Ａ）尾，５′非编码区 （ＵＴＲ）为４０ｂｐ。ＯＲＦ可编码３６１个氨基酸，预测分子量为４０．４２３ｋｕ，理论等电点为６．１９。序列含有一个谷 氨酰胺结合结构域（Ｇｌｎｓｙｎｔ＿Ｃ），８个磷酸化位点，２个糖基化位点。斑节对虾和中国明对虾的ＧＳ基因的相 似性最高，达９９％。ＰｍＧＳｍＲＮＡ在斑节对虾各组织中都有表达，在淋巴组织中表达量最高，其次为鳃组织， 在胸神经中的表达量最低。９６ｈ高浓度氨氮胁迫后，ＰｍＧＳｍＲＮＡ在肝胰腺中的表达水平显著高于对照组， 但在鳃中的表达水平显著低于对照组（Ｐ＜０．０５）。以上结果暗示，ＰｍＧＳ在氨氮代谢方面具有重要的作用，可 能参与了斑节对虾机体的急性氨氮胁迫应答反应。 关键词：斑节对虾；谷氨酰胺合成酶；基因克隆；氨氮胁迫；组织表达 中图分类号：Ｓ９１７，Ｓ９６８．２２　　　文献标志码：Ａ ［４］ ［５］ 　　谷氨酰胺合成酶（ｇｌｕｔａｍｉｎｅｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ，ＧＳ） 动物，比如在仓鼠（Ｃｈｉｎｅｓｅｈａｍｓｔｅｒ） 、鸡 以及 广泛存在于动植物细胞中，在甲壳动物氨氮代谢 ［６］ 人类 中都曾有过报道，但在无脊椎动物特别是 过程中发挥着重要作用［１］。谷氨酰胺合成酶通 甲壳动物中研究还比较少。ＪＡＭＩＥＳＯＮ等研究发 过将体内过多的氨和谷氨酸转换成谷氨酰胺，降 现，ＧＳ在环节动物Ｅ．ｊａｐｏｎｅｎｓｉｓ的原肾管和胆管 低体内氨氮的浓度，达到解毒代谢的目的。谷氨 细胞中均有表达，这与Ｅ．ｊａｐｏｎｅｎｓｉｓ氮代谢产物 ［１］ 酰胺是一种中性无毒物质，容易穿透细胞膜，是 的排泄有关 。目前已从昆虫，如埃及斑蚊 ［７］ ［８］ 氨的主要运输方式。排氨动物体内的氨主要是 （Ａｅｄｅｓａｅｇｙｐｔｉ） 沙蝇（Ｌｕｔｚｏｍｙｉａｌｏｎｇｉｐａｌｐｉｓ） 、 经谷氨酰胺运送到排泄部位，如鳃等，再经鳃内 ［９］ ［１０］ ［１１］ 果蝇幼虫 和成虫 ，昆虫神经系统和肌肉 、 ［２］ ［１２］ ［１３］ 谷氨酰胺酶的分解，借助扩散作用排出体外 。 脂肪体、中肠、马氏管 、丝线 中发现 ＧＳ存 谷氨酰胺合