烟草甲两个羧酸酯酶基因的克隆及表达模式-中山大学学报.PDF

第５７卷　第４期 中山大学学报 （自然科学版） Ｖｏｌ５７　Ｎｏ４ 　 ２０１８年　７月 ＡＣＴＡ　ＳＣＩＥＮＴＩＡＲＵＭ　ＮＡＴＵＲＡＬＩＵＭ　ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＡＴＩＳ　ＳＵＮＹＡＴＳＥＮＩ Ｊｕｌ　２０１８　 ＤＯＩ：１０１３４７１／ｊｃｎｋｉａｃｔａｓｎｕｓ２０１８０４０１９ 烟草甲两个羧酸酯酶基因的克隆及表达模式 １，２ ３ １ ２ １ １ 朱晓晔 ，丁天波 ，许抗抗 ，周江 ，李灿 ，杨文佳 （１．贵阳学院生物与环境工程学院 贵州省山地珍稀动物与经济昆虫重点实验室，贵州贵阳５５０００５； ∥ ２．贵州师范大学生命科学学院，贵州贵阳５５０００１； ３．青岛农业大学植物医学学院，山东青岛２６６１０９） 摘　要：为了深入了解羧酸酯酶 （Ｃａｒｂｏｘｙｌｅｓｔｅｒａｓｅ，ＣａｒＥ）基因在烟草甲Ｌａｓｉｏｄｅｒｍａｓｅｒｒｉｃｏｒｎｅ生长发育及响应 ＣＯ气调胁迫方面的作用，在转录组测序基础上，利用ＲＴＰＣＲ技术克隆了烟草甲２个ＣａｒＥ基因ｃＤＮＡ全序列， ２ 对其分子特性和系统发育进行分析，并利用实时定量ＰＣＲ技术检测其在不同发育阶段及不同 （ＣＯ）气调胁迫 φ ２ 条件下的表达模式。获得了烟草甲２个ＣａｒＥ基因完整的开放阅读框，其长度为１６９８ｂｐ和１６９５ｂｐ，编码５６５ 和５６４个氨基酸。氨基酸同源性和系统进化树分析表明，它们均具有羧酸酯酶典型的保守结构域，且属于 家 β 族，分别命名为ＬｓＣａｒＥＢ１和ＬｓＣａｒＥＢ２（ＧｅｎＢａｎｋ登录号：ＭＧ１８９６０１和ＭＧ１８９６０２）。ＬｓＣａｒＥＢ１和ＬｓＣａｒＥＢ２在烟 草甲的各发育阶段均有所表达，其中在高龄幼虫期的表达量较高，显著高于低龄幼虫、蛹和成虫期的表达水平。 ＬＣ 、ＬＣ和ＬＣ ３种 （ＣＯ）处理６ｈ后，ＬｓＣａｒＥＢ１和ＬｓＣａｒＥＢ２的ｍＲＮＡ表达量随胁迫 （ＣＯ）升高而上调且 １０ ３０ ５０ φ ２ φ ２ 显著高于对照组。推测ＬｓＣａｒＥＢ１和ＬｓＣａｒＥＢ２不仅对烟草甲的生长发育具有重要作用，而且是其响应ＣＯ气调胁 ２ 迫的重要机制之一。 关键词：烟草甲；羧酸酯酶；克隆；表达模式；ＣＯ胁迫 ２ 中图分类号：Ｑ７８　　文献标志码：Ａ　　文章编号：０５２９－６５７９（２０１８）０４－０１３６－０９ Ｃｌｏｎｉｎｇａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｗｏｃａｒｂｏｘｙｌｅｓｔｅｒａｓｅｇｅｎｅｓｉｎ ｔｈｅｃｉｇａｒｅｔｔｅｂｅｅｔｌｅ，Ｌａｓｉｏｄｅｒｍａｓｅｒｒｉｃｏｒｎｅ （Ｃｏｌｅｏｐｔｅｒａ：Ａｎｏｂｉｉｄａｅ） １，２ ３ １ ２ １ １ ＺＨＵＸｉａｏｙｅ ，ＤＩＮＧＴｉａｎｂｏ，ＸＵＫａｎｇｋａｎｇ，ＺＨＯＵＪｉａｎｇ，ＬＩＣａｎ，ＹＡＮＧＷｅｎｊｉａ （１．ＧｕｉｚｈｏｕＰｒｏｖｉｎｃｉａｌＫｅｙＬａｂｏｒ