放疗和DSF联合治疗乳腺癌的研究-妇产科学专业论文.docx

万方数据 万方数据 摘 摘 要 放疗和 DSF 联合治疗乳腺癌的研究 博士研究生：张 楠 导 师：张 展 专 业：妇产科学 郑州大学第三临床学院 河南 郑州 450052 摘 要 乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，我国乳腺癌发病率占全身各种恶性 肿瘤的 7%~10%，并呈逐年上升趋势，部分大城市报告乳腺癌已占女性恶性肿瘤 之首。乳腺癌是全球女性疾病发病率和死亡率的主要原因。据国家癌症中心和 卫生部疾病预防控制局 2012 年公布的 2009 年乳腺癌发病数据显示：全国肿瘤 登记地区乳腺癌发病率位居女性恶性肿瘤的第 1 位，女性乳腺癌发病率（粗率） 全国合计为 42.55/10 万，城市为 51.91/10 万，农村为 23.12/10 万。 乳腺癌的治疗进入了综合治疗时代，形成了乳腺癌局部治疗与全身治疗并 重的治疗模式。放疗主要是清除残留的乳腺癌细胞，从而达到较好的控制肿瘤 生长和提高病人的存活率,但是细胞对辐射的抗辐射性提高了肿瘤的复发率，又 妨碍了放疗的抗肿瘤效应，也就是说乳腺癌细胞对 IR 产生了耐受，这样就影响 了 IR 的抗肿瘤效应，肿瘤易复发。 乳腺癌细胞对 IR 的这种抗辐射性，可能是因为乳腺癌干细胞（Breast cancer stem cells, BCSCs)的存在。已有文献证实，乳腺癌干细胞具有抗辐射 性。已经有文献研究认为，IR 可诱导非乳腺癌干细胞（即正常乳腺上皮细胞） 转换为乳腺癌干细胞（以下讲述将乳腺癌干细胞成为 BCSCs）。 而这种细胞的转换可能与干细胞基因（c-myc、SOX9，OCT4 和 KLF4 等）的 表达有关，有研究发现该基因通过逆转录传导，可重新编码为具有多能性的干 细胞，这种多能性的干细胞又可分化为不同类型的细胞。这些基因编码的转录 因子在肿瘤干细胞生长和自我更新中起到重要的作用。转录因子 Slug 和 SOX9 在正常和恶性细胞中可共同检测乳腺干细胞状态。此外，癌症重组转录因子的 I 过表达与进行性肿瘤和不良预后相关。有研究发现 IR 通过干细胞基因的再表达， 引导分化型癌细胞转变为 BCSCs。 研究表明：乙醛脱氢酶（Aldehyde dehydrogenase, ALDH）可作为癌干细 胞的标记物。在文献中，人和鼠乳腺癌细胞中发现 ALDH1 表达增高，认为这些 细胞可能是乳腺癌干细胞；这也是本实验的研究基础。 双硫仑（Disulfiram，DSF）是美国 FDA 批准用于治疗酗酒的一种药物，同 时也是一种不可逆的 ALDH 亚型的抑制剂。许多学者研究发现，在细胞内 DSF 可 转换为二乙基二硫代氨基甲酸酯（diethyldithiocarbamate,deDTC）,两分子的 deDTC 可以和一分子的铜（copper，Cu2+）相结合形成 Cu[deDTC]2 复合物 DSF/Cu； 如多学者对 DSF/Cu 研究发现，它是一种有效的蛋白体酶抑制剂，可以抑制 NF- κB 信号通路。 NF-κB 在细胞因子诱导的基因表达中起关键性的调控作用，它调控的基因 编码急性期反应蛋白、细胞因子、细胞粘附分子、免疫调节分子、病毒瘤基因、 生长因子、转录和生长调控因子等。通过调控多种基因的表达，NF-κB 参与免 疫反应、炎症反应、细胞凋亡、肿瘤发生等多种生物进程。NF-κB 是调节许多 基因活性的关键转录因子，这些基因包含细胞凋亡，炎症反应和抗辐射性等。 NF-κB 还可以调控干细胞基因，例如 ERBB2，SOX9，MYC 和 WNT 等的表达。 本研究是想通过局部治疗和全身治疗相结合的方法来开发一种新疗法，即 通过放疗和 DSF 相结合作为一种新的治疗方法来治疗乳腺癌。 目 的 本研究提出以下假设：DSF/Cu 是否在体内外的试验中下调 NF-κB 信号传 导通路，是否可以提高病人对化疗的敏感性，来消除放疗诱导由非乳腺癌干细 胞转变为乳腺癌干细胞，从而达到治疗的效果。 材料和方法 1 研究对象 （1）人乳腺癌细胞系 MDA-MB-231，MDA-MB-231-luc-D3H1，SUM149， UACC-812 细胞和鼠乳腺癌细胞系 4T1 细胞用含有 10%胎牛血清和 2mmol/L 的 II lutamine 的 RPMI 1640 培养基培养。这种细胞培养基被称为完全培养基。正 常人乳腺上皮细胞是用 MammaryLife Medium Complete Kit 培养。所有的细胞都 是放在含有 5% CO2 的 37℃的细胞培养箱中培养。 （2）6 周龄的 NOD/SCID 的雌鼠来自 Taconic,6 周龄的 BALB/c 的雌鼠来自 美国麻省综合医院 COX7 动物部门。所有的动物实验都经由 Insititutional Animal Care 和 Use C