代谢综合征大鼠肠系膜动脉和主动脉内皮型一氧化氮合酶磷酸化的变化及机制-病理学与病理生理学专业论文.docx

代谢综合征大鼠肠系膜动脉和主动脉内皮型一氧化氮合酶磷酸化的 变化及机制 病理学与病理生理学 研究生：丁菁 导师：陆德琴教授 摘要 目的 以代谢综合征(metabolic syndrome, MS)大鼠为研究对象，观察代谢综 合征病程中动脉血管内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase, eNOS) 磷酸化的变化并探讨其可能的机制。 方法 成年雄性 SD 大鼠 96 只，随机分为 正常对照 8 周组(Control-8w, n=16)、代谢综合征 8 周组(MS-8w, n=16)，正常对照 16 周组(Control-16w, n=16)、代谢综合征 16 周组(MS-16w, n=16)，正常对照 20 周组(Control-20w, n=16)和代谢综合征 20 周组(MS-20w, n=16)。Control 组予以普 通颗粒饲料喂养，MS 组予以高脂高盐饲料喂养。动态监测各组大鼠体重、鼠尾 静脉血糖及鼠尾动脉收缩压。至各组观测时间时处死大鼠，留取血清检测血糖、 血脂，并用 ELISA 法测血胰岛素含量；留取肠系膜动脉及主动脉，采用 Western Blotting 方法检测各组大鼠肠系膜动脉及主动脉 eNOS 总蛋白表达、eNOS Ser1177、 eNOS Ser633 位点磷酸化水平变化，Akt 总蛋白表达、Akt Thr308、Akt Ser473 位点 的磷酸化水平变及 ERK1/2、p-ERK1/2 蛋白表达变化；采用硝酸还原酶法检测肠 系膜动脉和主动脉中 NO 含量。结果 ①与 Control 组比较，MS 组大鼠于高脂高 盐饲料喂养后 8w 时体重明显增加、血胰岛素水平升高，部分还出现脂质代谢紊 乱和血压升高，并持续至 16w、20w。②与同时间点 Control 组比较，肠系膜动 脉 eNOS 总蛋白、eNOS Ser1177、eNOS Ser633 水平 MS-8w 组明显增高(P＜0.05)， MS-16w 组无明显变化；MS-20w 组 eNOS 总蛋白无明显变化，但 eNOS Ser1177、 eNOS Ser633 水平明显降低(P＜0.05)；肠系膜动脉 NO 含量 MS-8w 组明显增高(P ＜0.05)，MS-16w 组无明显变化，MS-20w 组则明显降低。肠系膜动脉 MS-8w 组 Akt Thr308、Akt Ser473 水平及 p-ERK1/2 水平明显增高(P＜0.05)，MS-16w 组 Akt Thr308、Akt Ser473 水平亦无明显差异，但 p-ERK1/2 水平降低(P＜0.05)，MS-20w 组 Akt Thr308 位点磷酸化水平明显降低(P＜0.05)。③与同时间点 Control 组比较， 主动脉 eNOS 总蛋白、eNOS Ser633 水平 MS-8w 组明显增高(P＜0.05)，eNOS Ser1177 水平未见明显差异；MS-16w 组 eNOS 总蛋白、eNOS Ser1177、eNOS Ser633 水平 均无明显差异；主动脉 NO 含量 MS-8w 组明显增高(P＜0.05)，MS-16w 组无明 贵阳医学院 贵阳医学院 2012 届硕士研究生论文 PAGE PAGE 10 显差异。主动脉 p-ERK1/2 水平 MS-8w 组明显增高(P＜0.05)，而 MS-16w 组明 显降低(P＜0.05)。主动脉 Akt 总蛋白、Akt Thr308、Akt Ser473 水平及 ERK1/2 水 平在 MS-8w 组和 MS-16w 组均无明显变化。结论 ①通过喂养高脂高盐饲料可成 功复制 MS 大鼠模型。②MS 发病早期 eNOS 蛋白表达及其 Ser1177、Ser633 磷酸化 增加。③MS 发病后期 eNOS Ser1177、Ser633 磷酸化水平降低，可能是内皮功能紊 乱发生的原因之一。④MS 病程中 PI3K/Akt、ERK1/2 信号通路活性发生变化， 可能参与了 eNOS 磷酸化的调控。 关键词：代谢综合征；内皮型一氧化氮合酶；磷酸化调控；磷脂酰肌醇-3 激酶； 细胞外信号调节激酶 1/2 前言 代谢综合征(metabolic syndrome, MS)是一个近十多年来才提出的新概念，指 一系列代谢紊乱和心脑血管危险因素在同一个体聚集，包括了中心性肥胖(腹型 肥胖)、血脂异常、高血压以及糖耐量异常等多种代谢异常。 早在上世纪六十年代就有人提出将糖耐量异常和高血压发生在同一个体时 称为―富裕综合症‖；1988 年，Reaven 将肥胖、Ⅱ型糖尿病、脂质代谢异常、高 胰岛素血症和冠心病共同发生在同一个体时称为―X 综合征‖；1989 年，Kaplan 将躯干性肥胖、糖耐量异