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沉默TRMT61A基因对人膀胱癌5637细胞 基因表达谱和FABP4表达的影响-泌尿外科学专业论文
学位论文原创性声明
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本项目由下列资金资助:
1. 国家自然科学基金面上项目
批准号2. 河南省重点科技攻关项目
批准号:112102310547
3. 河南省教育厅科技创新团队
批准号:14IRTSTHN020
沉默 TRMT61A 基因对人膀胱癌 5637 细胞基因表达
谱和 FABP4 表达的影响
研究生:李振辉 导师:宋东奎 教授
郑州大学第一附属医院泌尿外科 河南 郑州 450052 中文摘要
背景和目的
膀胱癌是泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤,近年来在西方国家发病率呈缓 慢下降趋势,但是近十年在我国的发病率及死亡率却呈逐年上升趋势。另一方 面,膀胱癌需终生监测复发情况,膀胱癌的诊断、治疗、及复发监测等医疗费 用在所用肿瘤中是最高的,给社会和患者带来沉重的经济负担。膀胱镜检查和 尿脱落细胞学检查是膀胱癌复发监测最常用的手段,但是膀胱镜检查属侵入性 检查,且费用较高,而尿脱落细胞学检查虽然特异性较高,但是敏感性较低, 因此需要研究新的诊断和复发监测手段。
尿液修饰核苷作为非常有潜力的肿瘤标志物对于多种肿瘤的诊断、病情检 测及预后评估具有重要意义。我们前期实验发现,1-甲基腺苷(m1A)和 1-甲 基次黄苷(1-mel)联合检测膀胱癌具有很高的灵敏度(92.45%)和特异性
(87.50%)。因此,尿液修饰核苷可能成为有潜力的膀胱癌诊断和复发监测的标 志物。
m1A 由 m1A58 甲基转移酶(hTrm6P/hTrm61P)催化 tRNA58 位的腺苷(A) 生成,其中 hTrm61p 由 TRMT61A 基因编码,是其中的催化亚基。在后续实验 中发现 TRMT61A、hTrm61p 在膀胱癌组织中高表达。应用 RT - qPCR 技术在人 膀胱癌细胞系 T24、5637、EJ 中筛选出 TRMT61A 高表达细胞株 5637,在 5637 细胞中应用 siRNA 技术沉默 TRMT61A 后,细胞增殖减慢、凋亡增多、侵袭性 减弱。说明 TRMT61A 在膀胱癌的发生发展中发挥重要作用。
本研究在前期工作的基础上,应用基因芯片技术检测在 5637 细胞中沉默
TRMT61A 对基因表达谱的影响,并应用 panther 数据库对其中的差异基因进行
I
Go Term 分析,研究 TRMT61A 在膀胱癌发生发展中可能的信号通路。基因芯
片中差异倍数超过 5 的有四个基因,其中 FABP4 在沉默 TRMT61A 后表达明显 升高。大量研究表明,FABP4 在膀胱癌组织中低表达,且与病理分级、分期及 预后较差明确相关,因此应用 RT – qPCR 技术验证在 5637 细胞中沉默 TRMT61A 基因对 FABP4 表达的影响。
方法
1 基因芯片 共分两组:Lip2000(lipofectamineR2000 处理的 5637 细胞),siRNA 组(lipofectamineR2000 转染 TRMT61A - siRNA 的 5637 细胞)。在 5637 细胞中, siRNA 技术沉默 TRMT61A,RT – qPCR 技术检测沉默效率,当沉默效率至约 70%时,送检基因芯片,检测基因表达谱的改变。利用 panther 数据库,对差异 基因进行 Go Term 分析。
2 RT – qPCR 技术验证 5637 细胞中沉默 TRMT61A 对 FABP4 mRNA 表达的影 响 实 验 共 分 四 组 : blank 组 ( 未 做 任 何 处 理 的 5637 细 胞 ), Lip2000
(lipofectamineR2000 处理的 5637 细胞),NC 组(lipofectamineR2000 转染 negative control-siRNA 的 5637 细胞),siR
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