烟草类胡萝卜素异构酶基因的克隆及功能研究-中国烟草学报.PDF

138 中国烟草学报　2014 年12 月 第20 卷 第6 期 生物技术 烟草类胡萝卜素异构酶基因的克隆及功能研究 1, 2 2 2 2 2 史艳梅 ， ， ， ， ， 王燃 杨军 罗朝鹏 李锋 2 2 2 1, 3 2 武明珠 ， ， ， ， 魏春阳 林福呈 屈凌波 魏攀 1 郑州大学化学与分子工程学院，河南省郑州市高新技术产业开发区科学大道 100 号 450001; 2 中国烟草总公司郑州烟草研究院，河南省郑州市高新技术产业开发区枫杨街2 号 450001; 3 河南工业大学化学化工学院，郑州高新技术产业开发区莲花街 100 号 450001 摘　要： Nicotiana tabacum 为进一步研究烟草类胡萝卜素异构酶（Carotenoid isomerase，CRTISO ）基因的功能，从普通烟草（ ） 的cDNA 中成功克隆出CRTISO 基因编码区（CDS ）全长，长度为1716 bp，Blast 结果显示与马铃薯（Solanum tuberosum ）和 番茄（Solanum lycopersicum ）的前番茄红素异构酶（Prolycopene isomerase ）基因的相似度达93% 。将CRTISO 基因的部分序列 插入烟草脆裂病毒（Tobacco rattle virus，TRV ）载体中，构建重组载体pTRV2-CRTISO 。通过TRV 病毒诱导的基因沉默（Virus Nicotiana benthamiana CRTISO induced gene silencing，VIGS ）系统抑制本氏烟草（ ） 基因的表达，同时利用实时荧光定量PCR （Real-time PCR ）检测CRTISO 下游基因的表达量变化。结果表明，与对照组相比，pTRV-CRTISO 载体侵染的烟草叶片出现黄 色斑点；CRTISO 基因的沉默导致下游番茄红素ε环化酶（ε-LCY ）、番茄红素β环化酶（β-LCY ）和胡萝卜素β- 环羟化 酶（β-OHase ）基因表达量降低。对烟草CRTISO 基因功能的研究有助于揭示烟草中类胡萝卜素合成代谢途径的调节机制，为选 育优质烟草品种奠定理论基础。 关键词：普通烟草；类胡萝卜素异构酶；实时荧光定量 PCR ；病毒诱导的基因沉默 doi ：10.3969/j.issn.1004-5708.2014.06.022 中图分类号：Q81　　　文献标志码：A　　　文章编号：1004-5708 （2014 ）06-0138-06 Cloning and functional analysis of CRTISO gene in Nicotiana tabacum