番茄NAC转录因子SlNAC11的克隆及功能研究-生物学专业论文.docxVIP

中文 中文摘要 重庆大 重庆大学硕士学位论文 I I PAGE PAGE VI 摘 要 NAC（矮牵牛 NAM，拟南芥 ATAF1/2 和 CUC1/2）转录因子是近年来发现的 具有多种生物学功能的植物特异性转录因子。该家族蛋白所具有的共同特点是 N 末端都拥有高度保守的 DNA 结合区域（约 150 个 AA）和 C 末端高度变异的转录 调控区。作为植物特异的转录因子家族之一，NAC 结构域蛋白在植物生长发育， 叶片衰老，顶端分生组织的发育，花发育，植物激素信号调控，次生壁的形成以 及抵抗逆境等方面都发挥着重要作用。 本研究中，我们以番茄 AC++为研究主体，对 NAC 家族的新成员 NAC11 进行 了研究，主要研究内容及结果如下： （1） 从番茄中克隆得到目的基因，并将其命名为 SlNAC11，其 cDNA 编码 一条 350 个氨基酸的肽链。该基因的氨基酸序列和已知 NAC 家族蛋白比对发现， 同其他已知蛋白一样，该蛋白 N 末端结构域可以被分为 A-E 五个亚区域，且在 C 和 D 区域高度保守；系统发育树分析表明，SlNAC11 和 RD26 及 OsNAC6 较为相 似，初步断定该目的基因可能属于 ATAF1 亚家族，主要参与胁迫响应； （2） SlNAC11 基因在番茄中的组织表达模式研究表明，该基因在番茄幼叶、 成熟叶和衰老叶片中的表达量呈下降趋势，且在幼叶中表达量最高，说明该基因 可能参与叶片的发育调控及对外界环境的响应； （3） 根据 RNAi 实验原理及方法，我们构建了 SlNAC11 基因的 RNAi 载体 SlNAC11-RNAi，转化番茄 AC++，并获得转基因株系，为进一步研究 SlNAC11 基因 的功能奠定了基础； （4） 多种外源激素（ABA、ACC、MeJA、GA3 和 IAA）处理野生型番茄 AC++幼苗，经 qRT-PCR 分析，结果表明 SlNAC11 的表达受外源激素 ABA、MeJA 和 GA3 的诱导，暗示该基因可能参与这些激素的调控过程； （5） 非生物胁迫（低温、高温、脱水和盐）处理野生型番茄 AC++幼苗， qRT-PCR 结果表明，SlNAC11 的表达受高/低温和脱水处理的强烈诱导，受盐处理 的微弱诱导，说明 SlNAC11 基因可能参与这些非生物胁迫响应； （6） 转基因 T1 代种子萌发的盐敏感性及转基因幼苗 ABA 敏感性实验表明， SlNAC11 基因沉默导致番茄种子萌发对盐环境更加敏感，对盐的耐受力降低，致使 种子萌发率较野生型低，然而转基因幼苗对盐的灵敏性和野生型无明显差异；转 基因幼苗对外源 ABA 的敏感性降低，说明该基因可能是依赖于 ABA 途径的胁迫 响应因子； （7） T1 代转基因阳性株系干旱胁迫处理结果及相关生理指标检测结果显 示， SlNAC11 基因沉默导致番茄对干旱环境的耐受能力降低。 综上所述，经生物信息学分析可知，SlNAC11 基因是 ATAF 亚家族的成员； 定量 PCR 检测激素和非生物胁迫处理下 SlNAC11 表达量变化情况显示，该基 因受 ABA，MeJA 和外界环境等因素处理的诱导；转基因 T1 代相关实验结果 表明，番茄中沉默 SlNAC11 基因的表达导致（1）转基因番茄 T1 代种子萌发 过程中对盐胁迫的的敏感性增加，然而幼苗的敏感性却无显著变化，（2）阳 性转基因 T1 代幼苗对 ABA 的敏感性降低，（3）阳性转基因 T1 代幼苗的耐旱 能力降低。 关键词：NAC，番茄，SlNAC11，激素，非生物胁迫 英文摘 英文摘要 重庆大 重庆大学硕士学位论文 III III PAGE PAGE IV ABSTRACT NAC(Petunia NAM, Arabidopsis ATAF1/2 and CUC2) transcription factors, which were found to participate in diverse processes, belong to a large plant-specific TF family. All of their proteins share a highly conserved N-terminus containing the DNA-binding NAC domain is approximately 150 amino acids in length and a variable C-terminus which were considered to be a regulatory region of transcription. As one of the largest plant-specific transcription