人肥大细胞羧肽酶分泌型真核表达载体构建.docVIP

人肥大细胞羧肽酶分泌型真核表达载体的构建 　　【摘要】目的：构建人肥大细胞羧肽酶（hMC-CP）分泌型真核表达载体pcDNA3.1/CP。方法：用免疫球蛋白κ链的信号肽序列置换hMC-CP自身的信号肽序列，设计并合成引物，以hMC-CP基因为模板，扩增带有分泌信号肽的hMC-CP基因，DNA测序鉴定正确后，将PCR扩增产物定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1，通过酶切和DNA测序进行鉴定。结果：琼脂糖凝胶电泳显示PCR扩增出一条特异条带， 酶切鉴定和序列测定结果表明大小为1269bp的 DNA片段插入表达载体。结论：成功构建了hMC-CP分泌型真核表达载体，为进一步制备真核表达的重组hMC-CP奠定了基础。 　　【关键词】人肥大细胞羧肽酶；信号肽；载体；构建 　　文章编号：1009-5519（2008）22-3346-03 中图分类号：R392 文献标识码：A 　　 　　肥大细胞（mast cell，MC）是速发型超敏反应的始动细胞，激活后脱颗粒，产生和释放多种炎性介质。MC中性蛋白酶是其中一类重要的炎性介质，而MC羧肽酶(mast cell carboxypeptidae，MC-CP)又是中性蛋白酶的主要成分之一，约占总量的12%[1]。迄今为止，国内外对MC-CP的研究甚少，其病理生理作用及其作用机制迄今尚不清楚。MC-CP的获取是进行MC-CP的生物学功能的关键