一 教学要求实验八 酶联免疫吸附试验（ELISA）知识讲稿.pptVIP

一 教学要求 掌握酶联免疫吸附试验的基本方法及其原理 学习双抗夹心法检测抗原物质的基本操作 实验八 酶联免疫吸附试验（ELISA） （2）间接法测定抗体 A.????? 将抗原吸附于固相载体表面； B.????? 加抗体, 形成抗原-抗体复合物; C.????? 加酶标抗体； D. 加底物。 测定底物的降解量＝抗体量。 （3）双抗体夹心法测定抗原 A.????? 将抗体吸附于固相表面; B.????? 加抗原，形成抗原-抗体复合物; C.???? 加酶标抗体; E. 加底物。底物的降解量＝抗原量。 （4）竞争法测定抗原 A.???? 将抗体吸附在固相载体表面; B. 加入酶标抗原和待测抗原，竞争结合抗体； 对照只加入酶标抗原； C. 加底物。对照孔与样品孔底物降解量的差＝未知抗原量。 三 材料与器材（略） （1）抗体包被：羊抗人IgG 酶联板每孔加100 μL，4 ℃ 过夜；甩净。 （2）封闭：2% 小牛血清，每孔加100 μL，37 ℃ 封闭30 min；封闭后洗三次（前两次用自来水冲、甩； 第三次用洗液， 并静置 3 min，甩） （3）加待测抗原：正常人血清稀释成,1:5,1:10,1:20,1:40,1:80 ,生理盐水作为对照，每孔加 100 μL，注意从高稀释度到低稀释度加样，37 ℃ 孵育1