hiv感染的实验室诊断技术生化pbl 课件知识讲稿.pptx

生化PBL组员： 2.HIV抗体检测酶联免疫吸附试验（ELISA）颗粒凝集试验(PA）快速试剂(rapid test，RT)YYYYYY固相血清标本固相血清标本酶标记物YYYYYYYYYY酶联免疫吸附试验（ELISA）第一、二代第三代第四代颗粒凝集试验(PA）原理为将纯化的HIV抗原连接到红色明胶颗粒上制成致敏颗粒，当加入的检测标本中含有HIV抗体时，即可发生肉眼可见的凝集反应。优点操作简便，适合于小型实验室的HIV日常筛查工作，也可与ELISA方法配合用于筛查阳性标本的复检试验。3. HIV抗原检测用ELISA检测P24抗原，在HIV感染早期尚未出现抗体时，血中就有该抗原存在。由于P24量太少，阳性率通常较低。现有用解离免疫复合物法或浓缩P24抗原，来提高敏感性。 HIV-lp24抗原的阳性结果只能作为感染的辅助诊断，必须经确认试验确诊，p24抗原阴性也不能排除HIV感染的可能性。4.HIV核酸检测 HIV核酸的定性检测 HIV核酸的定量检测 生物芯片检测HIV核酸的定性检测方法原位杂交、RNA印迹、DNA印迹、多聚酶链反应(PCR)、逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)等，以PCR和RT-PCR最为常用。HIV核酸的定量检测1.RT-PCR2核酸序列扩增实验(NASBA)3.分枝DNA信号扩大系统(bDNA)为4荧光实时PCRRT-PCR多聚酶链式反应(PCR)主要用于检测血浆中HIV的RNA含量，目前主要用于预测母亲将HIV传染给胎儿的可能性以及新生儿的HIV感染状况。此外，尚可用于判断病人的预后及监测抗病毒治疗的效果。这种实验过程是在温度控制下进行的，一个变性--复性--延伸的过程就是一个PCR循环。PCR就是在合适条件下的这种循环的不断重复；延伸的产物经第二循环变性，亦与引物互补，作为引物引导DNA合成的新模板；因此，第二循环后延伸的模板由第一循环的4条增为8条，依此类推，以后每一个循环后的模板均比前一个循环增加1倍。特点：特异性强、敏感性高、快速、简便、对起始材料质量要求低等特点。 优点1.与传统检测抗体的方法相比，其灵敏度和特异性更高，从而对HIV的定量检测提供了有效的手段；2.不依赖于宿主的免疫反应，无须等到免疫系统对HIV产生抗体后才能检定宿主受HIV感染的状态，这有利于对血清阳转以前标本的检测和对阳性母亲所生婴儿的HIV感染的调查；3.对潜伏状态的HIV的检测不依赖于HIV在宿主细胞的生长活性。核酸序列扩增实验(NASBA)(NASBA)也属目标核酸扩增法，是一种等温扩增系统。原理是通过系统内的混合酶系统(包括逆转录酶、核糖核酸酶H和T7．RNA聚合酶)体外模拟逆转录病毒在细胞内的复制过程。优点：该方法对A～G各亚型均有较好反应性，能测定各种生物样品，对各种抗凝剂均适用缺点：样品提取和测定反应时要进行大量手工操作，实验内、外误差也相对较大。为什么艾滋病不可治愈？1.艾滋病病毒进入人体后，会攻击一类免疫细胞T细胞，导致它们遭到完全破坏，免疫系统出现了问题，自然就难以清除病毒了。2.如果艾滋病病毒进入潜伏期，病毒潜伏在免疫细胞中， HIV前病毒整合入宿主细胞基因组中，不发生复制作用，免疫会把HIV忽略不被免疫系统识别，自身免疫无法清除。这也可能导致药物对其无效。而艾滋病病毒可以通过被感染的供体细胞作为媒介在细胞间传播。一旦发现未受感染的靶细胞，供体细胞便将病毒传染给该细胞。 鸡尾酒疗法原指“高效抗逆转录病毒治疗”（HAART），是通过三种或三种以上的抗病毒药物联合使用来治疗艾滋病。该疗法把蛋白质抑制剂与多种抗病毒的药物混合使用，从而使艾滋病得到有效的控制。 鸡尾酒治疗方案1.基于蛋白酶抑制剂的鸡尾酒 疗法：1个蛋白酶抑制剂联合2个核苷类逆转录酶抑制剂。 2.基于非核苷类逆转录酶抑制剂的鸡尾酒疗法：1个非核苷类逆转录酶抑制剂， 联合2个核苷类逆转录酶抑制剂。 3.三个核苷类逆转录酶抑制剂的鸡 尾酒疗法 鸡尾酒的局限性主要表现在： 对早期艾滋病病人相当有效，但对中晚期患者的帮助不大，因为这些病人的免疫系统已被艾滋病毒不可逆性地破坏了； 此外此疗法的花费也甚高，并非一般人所能承受。药物治疗非常困难，不仅服用方法复杂，有副作用，而且价格昂贵，