工具酶的发现和研究报告.pptVIP

第一节 工具酶的发现和 基因工程的诞生 第一章 基因工程 “剪刀”——限制性核酸内切酶（简称限制酶） （二）基因操作工具的发现 即一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子。 特 点： 限制酶是在生物体(主要是微生物)内的一类酶，能将外来的DNA切断，由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的，故名限制性核酸内切酶。1970年科学家首次从细菌中分离到这种酶 这类酶存在于原核生物中有什么作用呢？ 切割外源DNA，使之失效，达到保护自身的目的。 专一性 限制性核酸内切酶(称限制酶)能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列,并且使每一 条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开 “剪刀”——限制性核酸内切酶 （二）基因操作工具的发现 如：大肠杆菌(E.coli)的一种限制酶能识别 GAATTC序列，并在G和A之间切开。 限制酶 什么叫黏性末端？ （二）基因操作工具的发现 被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 游离片段 要想获得某个目的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？一个目的基因有几个黏性末端？ 要切两个切口，产生四个黏性末端，两个。 如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？ 会产生相同的黏性末端。 是不是把两者的黏性末端黏合起来，这样就真的合成重组的DNA分子了? 实际还不够,还需要DNA连接酶进行连接。 “针线”——DNA连接酶 （二）基因操作工具的发现 DNA连接酶可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，即把梯子两边扶手的断口连接起来，这样一个重组的DNA分子就形成了。在1967年被科学家发现. （二）基因操作工具的发现 DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？为什么？ 不是一回事。相同点：形成磷酸二酯键 但是：1）DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯键；而DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键 2） DNA聚合酶需要以一条DNA链为模板；而DNA连接酶不需要模板。 “运输工具”——载体 （二）基因操作工具的发现 常用的载体主要有两类： 1）细菌细胞质的质粒 2）噬菌体或某些动植物病毒 原理：病毒，细菌等的侵染性。 （二）基因操作工具的发现 质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌染色体（即拟核DNA）之外，且具有自我复制能力的双链环状DNA分子。科学家利用质粒的这个特性,把它当成基因工程的载体. 有的一个细菌中有一个，有的一个细菌中有多个。 其中大肠杆菌的质粒是基因工程最常用的载体。 1973年,科学家将质粒作为基因的载体使用,为基因工程的诞生准备了另一个条件. 作为运载体必须具备哪些条件？ （二）基因操作的工具 1）能够在宿主细胞中自我复制并稳定地保存。 2）具有一个或多个限制酶切点，以便与外源基因连接。 3）具有某些标记基因，便于进行筛选。 1972年,科学家首次用一种限制酶切割猿猴病毒SV40的DNA和λ噬菌体DNA分子,然后使用DNA连接酶进行连接,形成了重组的DNA分子. （三）基因工程的诞生 1973年斯坦福大学的科学家进一步实现了细菌之间的性状转移. 1）以下说法正确的是 （ ） A、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 B、质粒是基因工程中唯一的运载体 C、载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接 D、基因控制的性状都能在后代表现出来 C 巩固练习 2）下列不是基因载体具备的条件的是 A、能自我 复制 （ ） B、有多个限制酶切点 C、具有标记基因 D、它是环状DNA D 巩固练习 3）有关基因工程的叙述中，错误的是（ ） A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来 B、 限制性核酸内切酶用于目的基因的获得 C、目的基因须由载体导入受体细胞 D、 人工合成目的基因不用限制性内切酶 A 巩固练习 4）有关基因工程的叙述正确的是 （ ） A、限制酶只在获得目的基因时才用 B、重组质粒的形成在细胞内完成 C、质粒都可作为载体 D、蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料 D 巩固练习 5。下列关于质粒的叙述，正确的是　　　　　　　　 A、质粒是广泛存在于细菌细胞中的一种颗粒状细胞器 B、质粒是细