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2000_纤维素酶纤维素吸附区的结构与功能 纤维素酶纤维素吸附区的结构与功能 汪天虹　王春卉　高培基 (山东大学微生物技术国家重点实验室, 济南　250100) 摘要　大多数纤维素酶含有催化区和可与纤维素结合且氨基酸序列较为保守的纤维素吸附区 (cellulose binding domain ,CBD ) 。纤维素吸附区促进酶与底物的结合, 有利于催化区对不溶性底物的作用, 但对可溶性底物的催化作用无影响。对CBD 结构的研究和进一步的诱变研究揭示:纤维素吸附区是通过几个芳香族氨基酸结合到纤维素表面。有实验证明外切葡聚糖酶的CBD 对结晶纤维素有疏解作用。CBD 结构域已成功地应用于一系列重组融合蛋白的纯化和固定化。对纤维素吸附区结构与功能的深入了解对进一步了解酶的作用机制, 促进纤维素酶类生物技术的发展是重要的。关键词　纤维素酶　纤维素吸附区　结构与功能　瑞氏木霉　　纤维素物质是年产量巨大的可再生性资源, 利用微生物生产的纤维素酶将其转化为人类急需的能源、食物和化工原料, 对于人类社会的可持续发展具有非常重要的意义。通过β-1,4的作用。已知的所有降解纤维素微生物都产生一组具有不同专一性的酶类, 彼此间以协同作用的方式共同催化纤维素的降解。对纤维素酶在分子水平进行的研究表明, 大多数纤维素酶含有催化区(catalytic domain ,CD ) 和没有催化作用的纤维素吸附区(cellulose binding domain ,CBD ) 。纤维素吸附区通常通过位于酶蛋白的N H 2或COOH 端。对CBD 序列之间同源性的比较以及采用小角度X 射 族Ⅰ 56K D 力, (protein , (binding domain , CBD ) 。此 序列较为保守的类似结构。催化区和纤维素吸附区之间通过一段相当长的, 高度糖基化的连结肽—链接区(Linker ) 而连结。112　CBD 的分类: G ilkes 和Coutinho 等均曾根据氨基酸序列的同 源性进行过CBD 的分类。Reinikainen 等将CBD 分为5类[3]。根据Reinikainen 等的分类, 其主要的CBD 类别的一些特性归纳于表1中列出。 表1　主要的CB D 类别的一些特性 氨基酸长度 30-36 典型来源及参考文献 来源自几种真菌如Trichoderma reesei , Hu 2 micala insuolens , Fusarium axysporum 等的纤维素酶的小CBD 。已知成员超过30个。典型结构为T. reesei CBHI CBD [4]. 包括Cellulomonas fimi , Thermomonospora fusca ,Pseudomonas fluorescens 和其它一些细菌的CBD 。已知成员超过30个。典型结构为C. Fimi Cex CBD [5]. 在C. thermocellum ,C. cellulovorans ,Bacillus lautus 和其它一些细菌中发现, 已知成员超过20个。典型结构为C. Thermocellum 和CipB CBD [6]. C. thermocellum EGE CBD Erwinia chrysanthemi EGZ CBD 线衍射、核磁共振及疏水基簇分析和进行定点诱变研究等方法, 在CBD 的结构、功能及与纤维素的吸附机制等方面有了较深入的了解。本文为近十年来此领域研究进展的简述。1　纤维素吸附区的结构与功能:111　CBD 的发现: Tilbeugh 等[1,2]1986年用木瓜蛋白酶有限水解 Ⅲ 131-178 Ⅱ86-138 瑞氏木霉(T richoderm reesei ) 的外切葡聚糖纤维二糖水解酶I (CBHI ) 后, 得到了只能水解可溶性纤维素和微弱吸附但不能水解不溶性纤维素, 分子量为 ⅣⅤ 24063 　　大多数CBD 位于酶蛋白的C 2末端或N 2末端, 37 少数位于中间。比较同一种微生物不同纤维素酶CBD 的氨基酸序列, 可发现它们往往具有序列同源性。真菌CBD 的序列之间有更多的相似性。真菌CBD 大约是细菌CBD 的三分之一, 两者之间还没 有发现明显的序列同源性。113　CBD 结构与功能的研究 由于至今尚未得到完整纤维素酶的晶体结构, 所有的结构研究工作都是用分离的结构域来进行的。采用多维核磁共振和X 射线衍射技术, 先后研究了族I T. reesei CBHI 、族ⅡC. Fi m i Cex 、族ⅢC. thermocell um CipB 等纤维素酶CBD 的3维结构。T. reesei CBHI 酶分子结构如图1[4] 。 径为0152±01006nm 。 研究了CBD 不同的β2片层拓扑学结构。T. reese