(4)_絮凝溶解技.pptx

沉 淀 技 术;2;生物分离过程的一般流程;4;1 机械破碎;;（2）珠磨;（3）喷雾撞击破碎;（4）超声波;2 物理破碎;（2）压力差破碎法 渗透压冲击;(3)干燥破碎 ??干燥破碎可采用空气干燥、真空干燥、喷雾干燥和冷冻干燥等。 ??干燥过程能使细胞膜渗透性改变，再用丙酮、丁醇或缓冲液等处理时，胞内物质就容易被抽提出来。 ;3 化学破碎法 原理：化学试剂改变或破坏细胞壁膜结构 常用试剂：碱液、有机溶剂、表面活性剂 ;4 酶学破碎法 外加酶制剂或自溶法 （1） 释放出克隆的胞内蛋白 （2） 制取特殊的壁葡聚糖聚合物 （3） 与机械细胞破碎法协同使用 （4） 从细胞内不同位置选择性地释放产物 ;沉淀 precipitation 是利用沉淀剂使目标产物或杂质在溶液中的溶解度降低而形成无定形固体凝聚物（aggregates）的过程。 ;沉淀技术的特点;沉淀技术的应用;应用沉淀技术应考虑的因素;沉淀技术的分类;沉淀操作的基本步骤;一 金属盐沉淀法;22;中和;二 盐析沉淀技术;25;26;27;1、蛋白质盐析的原理;29;双电层;31;盐析法机理;溶解度和离子强度的关系;ks 盐析常数;2、盐析方法的分类;3、影响盐析的因素;几点结论;（2） 离子类型和离子强度的影响;分步盐析;盐析用盐的基本要求;（3）pH 对盐析的影响 一般而言，蛋白质所带净电荷越多，它的溶解度越大。 改变pH 可以改变蛋白质的带电性质，即可改变蛋白质溶解度。;42;43;44;45;硫酸铵盐析操作;47;固体加入法：将硫酸铵磨碎成细粒，在搅拌下分批缓慢加入溶液中。当盐析要求饱和度较高而又不增大溶液的体积时，多用此法。 饱和液法：取过量硫酸铵加热（50度）搅拌溶解，保温10分钟，趁热滤去不溶物，放置过夜，第二天有少量硫酸铵析出即达到100%的饱和度。 盐析时所需加饱和液的体积 V=V0（S2-S1）/（1-S2） 透析平衡法：先将待盐析的样品装于透析袋内，然后进入饱和硫酸铵溶液中进行透析，硫酸铵逐步进入袋内达到盐析饱和度，产生沉淀。;49;盐析所需饱和度的试验确定：;51;52;53;等电点（PI）：溶液中蛋白质分子所带净电荷为零时的pH值。 蛋白质颗粒在溶液中所带的电荷，既取决于其分子组成中碱性和酸性氨基酸的含量，又受所处溶液的pH影响。 ;55;56;57;58;等电点沉淀法的应用;生物大分子的等电点易受盐离子的影响而发生变化： （1）若蛋白质结合钙镁锌等阳离子多，则等电点升高； （2）若蛋白质结合HPO42- 、SO42- 、Cl-等阴离子多，则等电点降低； （3）自然界中许多蛋白质较易结合阴离子，使等电点向酸侧移动。 例如，胰岛素等电点为5.3，与锌离子结合后，形成胰岛素锌盐，其等电点变为6.2。;概念：向水溶液中加入一定量亲水性的有机溶剂，降低溶质的溶解度，使其沉淀析出的分离纯化方法。 原理： （1）加入亲水性有机溶剂后介质的介电常数降低 根据库仑定律： k: 库伦常数 q: 粒子所带电量 r: 粒子间距离 F：作用力 ε: 介电常数 ;62;有机溶剂沉淀技术的优缺点：;有机溶剂沉淀的影响因素;65;66;67;68;69;沉淀金属离子;有机溶剂浓度的计算：;72;73;74;75;丁二酮肟-Ni;77;78;79;80;81;82;83;非离子多聚物沉淀优点：;85;（1）金属复合盐 Mn2+、Fe2+、Co2+、Ni2+、Cu2+、Zn2+等可以与羧酸、胺及杂环等含氮化合物作用成盐沉淀 （2）有机盐法 苦味酸、苦酮酸、单宁、茶多酚等可以与蛋白质形成复合盐并沉淀。 （3）无机盐法 磷钨酸与磷钼酸与氨基酸作用形成盐类复合物沉淀。;87;88;89;90;91;92;93;94;95;96;97;98;99;100;101;102;103;104;絮 凝 分 离 技 术;絮凝沉淀法是在混悬的提取液或提取浓缩液中加入一种絮凝沉淀剂以吸附架桥和电中和方式与悬浮物发生分子间作用，使之沉降，除去溶液中的粗粒子，以达到精制和提高成品质量目的的一项新技术。絮凝剂的种类很多，有鞣酸、明胶、蛋清、101果汁澄清剂、ZTC澄清剂、壳聚糖等。 ;真溶剂分子： 1×10-7cm;108;109;絮凝作用机理;胶体由于所带电荷的斥力大于颗粒布朗运动的动能，所以能够在液体中稳定存在。当平衡