PCR结果的分析及应用+-+.pptVIP

北京市大兴区第一中学 PCR结果分析及应用 选修1 李传海 如何鉴定是否扩增到SRY基因片段呢？ 一 PCR结果分析-操作步骤 4.拔梳子 5.染色、点样 2.铺胶 3.放梳子 1.称取琼脂糖溶于TAE 缓冲液并加热融化 6.接通电源开始电泳 1.DNA在TAE缓冲液中带负电。 待检样本应该加在电源的哪一极？ DNA分子的运动方向如何？ 2.电泳时，大小不等的DNA分子所受阻力不同，迁移的速度不同。 3.核酸荧光染料可插入到DNA分子双链中，在紫外光的照射下，呈绿色荧光。 一 PCR结果分析-实验原理 问题1： M中的几个条带与加样孔的距离为什么不同？ M的作用是什么？ 一 PCR结果分析-结果分析 问题2：1-7为什么有的有条带，有的没有条带？ 推测 一 PCR结果分析-结果分析 ♀ ♀ ♀ ♂ ♂ ♂ ♂ 问题3：为什么1、4、6、7的条带亮度有差异？ 受哪些因素影响？ 一 PCR结果分析-结果分析 推测 实际 问题4：1号是女性却有扩增条带，原因是什么？ 如何验证？ 一 PCR结果分析-结果分析 ♂ ♂ ♂ ♂ ♀ ♀ ♀ ♂ ♀ ♂ ♂ ♀ ♂ ♀ 推测 实际 一 PCR结果分析-结果分析 ♂ ♂ ♂ ♂ ♀ ♀ ♀ ♂ ♀ ♂ ♂ ♀ ♂ ♀ 问题5：哪些因素可能导致扩增失败？ 如何验证？ 资料1：培育转植酸酶玉米操作过程示意图 基因工程中，哪些环节应用到PCR技术？ 二 PCR技术的应用 获取目的基因 目的基因有无 目的基因是否的转录 模板 引物 预期 结果 黑曲霉DNA 受体细胞DNA P2、P3 P2、P3 P2、P3 受体细胞RNA逆转录 产生的cDNA 电泳检测 有条带 二 PCR技术的应用 资料2：亨廷顿舞蹈症是一种的常染色体显性遗传病, 多在30～ 40岁发病。 CAG CAG ………… CAG CAG ……………………… 正常基因：（CAG）重复9-34次 致病基因：（CAG）重复39-73次 如何诊断个体3、4是否为患者？ 二 PCR技术的应用 正常基因： 致病基因： B A 2 杂合子： 1、3、4 纯合子： 二 PCR技术的应用 谢谢大家！ 先介绍M是不同大小的DNA分子片段，然后提问 * * * 先介绍M是不同大小的DNA分子片段，然后提问 * * *