低氧诱导自噬促进上皮性卵巢癌转移的机制研究-妇产科学专业论文.docx

上海交通大学医学院 上海交通大学医学院 2010 级博士学位论文 万方数据 万方数据 低 氧 诱 导 自 噬 促 进 上 皮 性 卵 巢 癌 转 移 的 机 制 研 究 摘要 研 究 目 的 ： 上皮性卵巢癌死亡率居妇科恶性肿瘤之首。大多数患者就诊时已处于晚期阶段， 虽然手术联合化疗是治疗晚期卵巢癌的标准，但患者极易复发和转移，预后较差。 因此，深入探讨上皮性卵巢癌发生侵袭转移的相关机制，并寻求新的治疗策略以改 善晚期卵巢癌的治疗效果和生存率是亟待解决的关键问题。 近年来，越来越多的研究表明自噬在卵巢癌发病机制及治疗中起着多重作用， 但自噬究竟是促进还是防止肿瘤的形成、增殖和转移一直有争议。另外，在多种肿 瘤中也发现缺氧和 HIF-1α 可在不同的水平调节自噬，与肿瘤发生进展、预后和转移 密切相关。 综上，本论文研究在缺氧环境下上皮性卵巢癌中自噬发生的情况及 HIF-1α 对其 的调控，同时在细胞及动物水平探讨缺氧-自噬在卵巢癌侵袭转移中的重要作用，并 探讨可能涉及的分子机制，为卵巢癌的靶向治疗和新药研发提供理论依据和新的治 疗靶点。 研究 方法 ： 1、在常氧和缺氧培养体系下，在上皮性卵巢癌细胞株（HO8910PM和HO8910）中， 通过免疫印迹法和免疫荧光技术检测自噬效应分子Beclin 1、LC3，以及HIF-1α的 蛋白水平和核移位，探讨缺氧诱导的自噬发生情况。 2、 分别在常氧和缺氧培养体系下，在上皮性卵巢癌细胞株，转染HIF-1α质粒或 siRNA-HIF-1α，或用药物NSC606985干预HIF-1α，进一步验证缺氧环境下HIF-1α 对自噬的调控。 3、应用自噬抑制剂3-MA或基因沉默技术抑制缺氧诱导的自噬，通过粘附实验、 Transwell迁移实验或Matrigel侵袭实验，分别观察上皮性卵巢癌细胞株粘附、迁 移和侵袭能力的改变，并考察RhoA信号途径及F-actin装配情况的差异，探讨低氧 诱导的自噬在卵巢癌侵袭转移中的作用，以及可能涉及的细胞骨架调控机制。 4、通过建立裸鼠HO8910PM原位移植瘤模型，并给予自噬抑制剂3-MA处理，比较 原发瘤瘤重及多脏器转移情况，同时分析其肿瘤原发灶及转移灶中自噬发生的情 况，在动物水平初步探讨自噬与卵巢癌转移的关系，并评估3-MA的抗癌效果， 为其潜在的临床应用价值提供数据支持。 研究 结果 ： 1、低氧微环境能够激活HIF-1α，并诱导上皮性卵巢癌细胞发生自噬。新型喜树碱类 药物NSC606985在纳摩尔浓度即可发挥对HIF-1α的调控作用，也因而实现对自噬 的调控，但药物效应有细胞类型特异性。 2、自噬抑制剂或基因沉默技术阻断低氧诱导的自噬可抑制卵巢癌细胞的迁移和侵 袭能力。低氧诱导自噬促进上皮性卵巢癌侵袭转移可能涉及细胞骨架改变及相关 的RhoA途径。 3、体内试验证实上皮性卵巢癌转移灶比原发灶自噬水平更高，自噬抑制剂3-MA能 抑制体内肿瘤细胞自噬水平，一定程度上能减少上皮性卵巢癌的转移率。 结论 ： 低氧应激激活 HIF-1α 和自噬。低氧诱导的自噬受 HIF-1α 调控，并能促进上皮 性卵巢癌侵袭转移，其机制可能涉及 RhoA 途径，并影响细胞骨架。3-MA 在体内外 均可抑制肿瘤细胞自噬，具有抗肿瘤转移作用。 关键词 ： 上皮性卵巢癌， 缺氧，缺氧诱导因子-1α，自噬，转移 The Role of Hypoxia-Induced Autophagy in the Metastasis of Epithelial Ovarian Cancer ABSTRACT O b j e ct i v e ： Epithelial ovarian carcinoma is the leading cause of death in women with gynecological cancer. Most patients are diagnosed at an advanced stage and have a poor prognosis. Currently, surgical tumor debulking, followed by chemotherapy is the standard treatment for advanced ovarian cancer. However, these patients are at great risk of recurrence and metastasis. Therefore, we discuss about related mechanism of invasion and metastasis of ovarian cancer, and novel treatment strategies