低剪切应力对血管内皮细胞自噬的影响及其机制的初步研究-基础医学专业论文.docx

万方数据 万方数据 低剪切应力对血管内皮细胞自噬的影响及其 机制的初步研究 论文作者签名: 指导教师签名: 论 文 评 阅 人 1 ： 封少龙，教授，硕导，南华大学 评阅人 2： 王 佐，教授，硕导，南华大学 答辩委员会主席： 文格波，教授，博导，南华大学 委员 1： 秦旭平，教授，硕导，南华大学 委员 2： 唐朝克，教授，博导，南华大学 委员 3： 易光辉，教授，博导，南华大学 委员 4： 刘录山，教授，硕导，南华大学 答辩日期：2015 年 5 月 16 日 南华大学学位论文原创性声明 本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含 其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学 位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文 中作了明确的说明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 作者签名： 年 月 日 南华大学学位论文版权使用授权书 本学位论文是本人在南华大学攻读（博/硕）士学位期间在导师指导下完成 的学位论文。本论文的研究成果归南华大学所有，本论文的研究内容不得以其它 单位的名义发表。本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校 有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部 或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保留学位论文；学校可根据国家或 湖南省有关部门规定送交学位论文。同意学校将论文加入《中国优秀博硕士学位 论文全文数据库》，并按《中国优秀博硕士学位论文全文数据库出版章程》规定 享受相关权益。同意授权中国科学信息技术研究所将本学位论文收录到《中国学 位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。对于涉密的学位论 文，解密后适用该授权。 作者签名： 年 月 日 导师签名： 年 月 日 低剪切应力对血管内皮细胞自噬的影响及其机制的 初步研究 摘要：[目的]观察低剪切应力对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)自噬的 影响并探讨其机制。[方法] (1) apoE-/-小鼠喂饲高脂饮食，分别于 0、 4、8 和 12 周处死，取主动脉窦部做冰冻切片，主动脉提蛋白。HE 和油红 O 染色法观察动脉粥样硬化(Atherosclerosis, As)斑块病变；免 疫组织化学法和 Western blot 检测 BECLIN 1、LC3 和 P62 以及 TET2 的蛋白表达；免疫荧光法观察 5-mC 和 5-hmC 的含量。(2)将 HUVECs 置于体外灌流系统，分别以低剪切应力(5 dyne/cm2)和正常剪切应力 (15 dyne/cm2)处理 1h，Western blot 检测 BECLIN 1、LC3 和 P62 以及 TET2 的蛋白表达。再以巴伐洛霉素孵育 2h，观察 LC3II/LC3I 的比值。 (3)低表达和高表达 TET2 质粒转染 HUVECs，Western blot 检测 BECLIN 1、LC3 和 P62 的蛋白表达。再以不同剪切应力处理 1h， Western blot 检测 BECLIN 1、LC3、P62 和 ET-1 及 eNOS 的蛋白表达。 [结果]随着高脂饮食时间的延长，As 病变程度逐渐加重。As 病变进 程中 BECLIN 1、LC3 和 P62 的蛋白含量显著增加；TET2 的蛋白表 达明显降低；5-mC 的含量显著增加，且其增加幅度显著高于 5-hmC。 与正常剪切应力组相比，低剪切应力组 BECLIN 1 和 LC3II/LC3I 的 蛋白表达降低；自噬障碍标志物 P62 的蛋白表达增加；TET2 的蛋白 表达降低。巴伐洛霉素孵育 2h 后，低剪切应力组 LC3II/LC3I 无明显 变化，而正常剪切应力组 LC3II/LC3I 明显增大。不同剪切应力处理 I 后，高表达 TET2 可以上调 BECLIN 1、LC3II/LC3I 及 eNOS 的蛋白 表达，下调 P62 及 ET-1 的蛋白表达；而低表达 TET2 可以下调 BECLIN 1、LC3II/LC3I 及 eNOS 的蛋白表达，上调 P62 及 ET-1 的蛋白表达。 [结论]低剪切应力下调血管内皮细胞 TET2 的蛋白表达从而抑制血管 内皮细胞自噬。 关键词：低剪切应力；血管内皮细胞；自噬；TET2；动脉粥样硬化 II THE PRELIMINARY STUDY OF THE EFFECT AND MECHANISM OF LOW SHEAR STRESS ON VASCULAR ENDOTHELIAL CELLS AUTOPHAGY Xiaohong Li (Pathology and P