弓形虫毒力因子ROP18激酶的致病分子机制研究-生物化学与分子生物学专业论文.docx

安徽医 安徽医科大学硕士学位论文 PAGE PAGE 10 英文缩略词表（Abbreviation） 英文缩写 英文全称 中文全称 ROP18 IF rhoptry proteins 18 immunofluorescence 棒状体蛋白 18 细胞免疫荧光 RT-PCR  reverse transcription polymerase chain reaction 逆转录聚合酶链式反应 PCR polymerase chain reaction 聚合酶链反应 AIDS acquired immune deficiency syndrome 获得性免疫缺乏综合征 DEPC diethypyrocarbonate 焦碳酸二乙酯 DAPI 46-diamidino-2-phenylindole 4,6-二脒基-2-苯基吲哚 FBS fetal bovine serum 胎牛血清 BSA bovine serum albumin 牛血清白蛋白 DMEM dulbeccos modified eagle medium 培养液 SDS sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gelelectrophoresis 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺 凝胶电泳 FITC fluorescein isothiocyanate 异硫氰酸荧光素 WB western blotting 免疫印迹 PBS phosphate buffered saline 磷酸盐缓冲液 DMSO dimethyl sulfoxide 二甲基亚砜 TEMED N,N,N’,N’-tetramethylenediamine N,N,N,N-四甲基乙二胺 Tris 2-Amino-2-(hydroxymethyl)-1,3- propanediol  HYPERLINK /view/239452.htm 三羟甲基氨基甲烷 SDS sodium dodecyl sulfate,sodium salt 十二烷基硫酸钠 IgG immunoglobulin G 免疫球蛋白 G HRP horse radish peroxidase 辣根过氧化物酶 EDTA ethylene diaminetetraacetic acid 乙二胺四乙酸 MOPS 3-(N-Morpholino)propanesulfonic acid 3-(N-吗啉基）丙磺酸 cDNA complementary deoxyribonucleic acid 互补 DNA HEPES  4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanes- ulfonicaci  4-羟乙基哌嗪乙磺酸 Triton X- 100 polyethylene glycol mono(p-1,1,3,3- tetramethyl butyl)phenyl Ether  聚乙二醇单辛基苯基醚 弓形虫毒力因子 ROP18 激酶的 致病分子机制研究 硕士研究生 安然 导 师 都建 副教授 安徽医科大学生物化学教研室；安徽病原生物学省级实验室； 人兽共患病安徽省重点实验室（安徽医科大学） 中 文 摘 要 背景： 弓形虫是一种专性细胞内寄生虫，可以感染几乎所有的温血动物，会引起世界 范围内传播的人兽共患病。免疫功能正常人群感染弓形虫不会出现明显症状，但免 疫功能低下或缺陷者感染弓形虫则会引发严重的并发症，目前弓形虫感染已经成为 AIDS 和器官移植患者重要死亡因素之一。基因组数量特征分析、转基因弓形虫实 验及菌株杂交实验均证明 ROP18 能提高弓形虫的增殖速率，对感染动物有致死作 用，因此，ROP18 是弓形虫重要的毒力因子，本研究采用酵母双杂交方法筛选与 ROP18 相互作用的宿主蛋白，通过免疫沉淀、GST-pull down、酵母共转以及免疫荧 光进一步证实 ROP18 与宿主 NF-κB p65 的相互作用，提示 ROP18 可能通过宿主 NF-κB 发挥其致病作用，为弓形虫病致病机制研究提供依据。 目的： 采用酵母双杂交法筛选与弓形虫毒力因子 ROP18 相互作用的蛋白及 ROP18 与 NF-κB p65 相互作用的鉴定，为弓形虫致病机制研究提供依据。 方法： 本实验分为两部分：（1）RT-PCR 扩增弓形虫 RH 株速殖子 ROP18 基因片段， 扩增产物经双酶切后插入酵母双杂交诱饵载体 pGBKT7 中，将重组质粒导入酵母 AH109 菌株中，检测诱饵载体是否有毒性和自激活作用，利用酵母双杂交从人胚胎 脑 cDNA 文库中筛选与 ROP18 相互作用的蛋白；（2）RT-PCR 扩增弓形虫 RH 株速 殖子 ROP18 基因片段，扩增产物经双酶切