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实验室生物安全与个人防护 ——胡晓倩 主要内容： 一、实验室生物安全 二、实验室工作中面临的生物危害及防护 定义 实验室生物安全：为避免生物危险因子造成实验室人员暴露、向实验室外扩散并导致危害，保护实验室人员及其周围环境、人员安全的综合措施。 实验室生物危害：指在微生物和生物医学实验室研究过程中对人、环境、生态和社会造成的危害和对环境造成的污染。 实验室感染：在从事生物危害因子操作时，当实验室硬件条件缺失，管理制度不完善以及不规范的操作程序，会导致实验室人员暴露并出现感染。 生物危害因子 病毒、细菌、真菌、毒素和寄生虫等； 组织细胞的培养和某些类型的核酸转染； 来自感染的人和动物的血液、体液和各种组织等。 病原微生物分类 我国在《病原微生物实验室生物安全管理条例》中，按危害程度将病原微生物分为四类：第一类危害程度最高，第一、二类病院微生物统称为高致病性病原微生物，那些“我国尚未发现或已经宣布消灭的微生物”被列为一类病原微生物，第四类危害程度最低，即由第一类至第四类微生物的危害程度是递减的。 病原微生物分类 第一类病原微生物：能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。如天花病毒、黄热病毒等。 第二类病原微生物：能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物。如结核分枝杆菌、斑疹伤寒立克次体、布氏杆菌等。 第三类病原微生物：能够引起人类或者动物疾病，但一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物。如链球菌、脑膜炎奈瑟菌、致病性大肠埃希菌等。 第四类病原微生物：在通常情况下不会引起人类或者动物疾病的微生物。 生物安全实验室 生物安全实验室（biosafety laboratory, BSL）是指通过规范的实验室设计、实验设备的配置、个人防护装备的使用等建设的实验室。 按生物安全防护水平将生物安全实验室分为四级（biosafety level 1~4,BSL 1~4）,一级为最低，四级为最高。一级、二级实验室不得从事高致病性病原微生物的实验活动，三级、四级实验室从事高致病性病原微生物的实验活动。 安全设备是生物安全实验室的一级防护屏障，主要包括生物安全柜、高压灭菌器、离心机安全罩等；实验室设施是生物安全实验室的二级防护屏障。 生物安全柜 生物安全柜(biosafety cabinet,BSC)是直接操作危险性微生物时所用的负压过滤排风柜。 其防护原理是：从安全柜排除的空气经过高效过滤器（HEPA过滤器）过滤释放，以保护外环境；安全柜内形成的负压和气幕可以防止气溶胶外泄，以保护操作者；送入安全柜工作区的空气经过HEPA过滤器过滤，在安全柜内形成百级清洁度的环境，以保护操作对象。 生物安全柜的使用 参考国家标准和相关文献，对所有可能的使用者介绍生物安全柜的使用方法和局限性。发给工作人员书面的规章、安全手册或操作手册。特别需要明确的是，当出现溢出、破损或不良操作时，安全柜就不再能保护操作者。 生物安全柜运行正常时才能使用。 生物安全柜在使用中不能打开玻璃观察挡板。 生物安全柜的使用 安全柜内应尽量少放置器材或标本，不能影响后部压力排风系统的气流循环。 安全柜内不能使用本生灯，否则燃烧产生的热量会干扰气流并可能损坏过滤器。允许使用微型电加热器，但最好使用一次性无菌接种环。 所有工作必须在工作台面的中后部进行，并能够通过玻璃观察挡板看到。 尽量减少操作者身后的人员活动。 操作者不应反复移出和伸进手臂以免干扰气流。 生物安全柜的使用 不要使实验记录本、移液管以及其他物品阻挡空气格栅，因为这将干扰气体流动， 引起物品的潜在污染和操作者的暴露。 工作完成后以及每天下班前，使用消毒液对生物安全柜的表面进行擦拭。 在安全柜内的工作开始前和结束后，安全柜的风机应至少运行5min。 在生物安全柜内操作时，不能进行文字工作。 离心机的使用 在使用实验室离心机时，仪器良好的机械性能是保障微生物安全的前提条件。 按照操作手册来操作离心机。 离心机必须放置在地面上，使小个子工作人员也能够看到离心机内部，以正确放置十字轴和离心桶。 用于离心的试管和标本容器应当始终牢固盖紧（最好使用螺旋盖）。 离心桶的装载、平衡、密封和打开必须在生物安全柜内进行。 离心桶和十字轴应按重量配对，并在装载离心管后正确平衡。 离心机的使用 空离心桶用蒸馏水或乙醇（异丙醇，70％）来平衡。盐溶液或次氯酸盐溶液对金属具有腐蚀作用，因此不能使用。 当使用固定角离心转子时，必须小心不能将离心管装得过满，否则会导致漏液。 每天检查离心机内转子部