实验二 脂粒染色.pptVIP

类脂粒和易染颗粒染色法 一、 实验材料 实验菌株: 从SBR(Sequencing Barch Reactor Activated Sludge Process)反应器，经过1个月的厌氧好氧交替驯化，形成除磷能力很强的聚磷菌群。 类脂粒染色原理 细胞内含脂类储藏物的细菌。PHA聚羟基脂肪酸酯 ，在C/N高的环境中更易形成，用革兰氏染色不能使这类物质着色，被误认为是空胞。若用脂溶性染料染色，可将其与细胞内的空胞区别。 类脂粒染色药品 1）类脂粒染色液： 染色液：0.3%苏丹黑染液0.3g苏丹黑，溶于100ml的75%酒精; 褪色剂:二甲苯; 复染剂：0.5%番红染液。 操作步骤 1.制片：涂片---干燥---固定； 2.初染：在制片上滴0.3%苏丹黑染液，染10min，水洗，吸干； 3.脱色：用二甲苯冲洗涂片至无黑色素洗脱； 4.复染：用0.5%番红复染1-2min，水洗，吸干。 5.镜检：类脂类呈蓝黑色，菌体其他部分呈红色； 易染颗粒染色 易染颗粒是细菌储藏的物质；主要是多聚磷酸盐，随着菌龄的增加而变大，易被蓝色燃料染色，而呈红色或紫色不呈现蓝色，故名易染颗粒，如用吕氏美兰单染5min，易染颗粒呈深蓝色，菌体呈淡蓝色，也称Albert易染颗粒染色法。 易染颗粒染色药品 甲液：甲苯胺蓝0.15g 乙液：碘 2.0g，孔雀绿0.2g，KI3.0g，冰醋酸1ml溶于300ml，95%酒精。 易染颗粒染色步骤 1、滴甲液于涂片上染色5min，倾去； 2、滴加乙液冲去甲液，再染1min，水洗。 3、吸干、镜检。 4、易染颗粒呈黑色，菌体呈绿色或浅绿色。 类脂粒 实验报告 描述厌氧末期和好氧末期，2种方法获得的染色结果。（两种时期都颜色是什么？聚磷菌体多少？） * * * * * * * 聚磷菌是活性污泥工艺中的兼性细菌，在好氧或缺氧状态下能超量地将污水中的磷吸人体内，使体内的含磷量超过细菌体内含磷量的数倍. 　　当活性污泥中的聚磷菌生活在营养丰富的环境中，在将进入对数生长期时，为大量分裂作准备，细胞能从废水中大量摄取溶解态的正磷酸盐，在细胞内合成多聚磷酸盐，如具有环状结构的三偏磷酸盐和四偏磷酸盐；具有线状结构的焦磷酸盐和不溶结晶聚磷酸盐；具有横联结构的过磷酸盐等，并加以积累，供下阶段对数生长时期合成核酸耗用磷素之需。另外，细菌经过对数生长期而进入静止期时，大部分细胞已停止繁殖，核酸的合成虽已停止，对磷的需要量也已很低，但若环境中的磷源仍有剩余，细胞又有一定的能量时，仍能从外界吸收磷元素，这种对磷的积累作用大大超过微生物正常生长所需的磷量，可达细胞重量的6％-8％，有报道甚至可达10％。以多聚磷酸盐的形式积累于细胞内作为贮存物质。聚磷菌是生物除磷的主要完成者,并以菌胶团的形式大量存在。同时许多研究者也发现聚磷菌体内能聚集多聚磷酸盐(Poly-phosphate，即Poly-p)和聚β羟基丁酸(Poly-β-Hydroxybutyric acid，即PHB)。PHB和聚磷作为细菌细胞的内含物在生物除磷系统中起着重要的作用。 分别取厌氧池和缺氧池内的活性污泥，进行类脂粒(PHB)和异染粒(Poly-p)染色，并通过光学显微镜(10×100)进行观察。各段污泥的染色照片如图3-1、图3-2所示。其中图3-1中PHB颗粒染色后呈蓝黑色，菌体其他部分呈红色；图3-2中poly-P颗粒染色后呈深蓝色，菌体其它部分呈淡蓝色。 poly-P颗粒染色后呈深蓝色，菌体其它部分呈淡蓝色。 PHB颗粒染色后呈蓝黑色，菌体其他部分呈红色 1涂片：取洁净的载玻片，将一面在火焰上微微加热然后均匀的制成一薄层；2干燥：涂布后，使其自然的晾干或微微加热干燥；3 固定：将干燥后的涂片标本朝上，迅速过火焰2-3次，不要烫手为准，目的是杀死细菌而使菌体蛋白质凝固于载玻片上，改变他的透性。