实验五、GUS染色检基因瞬时表达.pptxVIP

实验五 GUS染色检测基因瞬时表达 王欢欢 二零一二.九 报告基因 gus基因（β-葡萄糖苷酸酶基因）是目前转基因植物中应用最为广泛的报告基因。 β-葡萄糖苷酸酶是一个水解酶，以β-葡萄糖苷酸酯类物质为底物，其反应产物可以用多种方法检测出来。 绝大多数植物没有葡萄糖苷酸酶的背景活性，因此gus作为报告基因广泛应用在植物基因工程中。 标记基因为gus的常用商业载体：pBI121 组织化学法检测 以5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸（X-Gluc）作为反应底物，将被检材料用含有底物的缓冲液浸泡。若组织细胞被转入了gus基因，并表达出Gus，适宜的条件下，该酶就可将X-Gluc水解生成蓝色产物。这是由其初始产物经氧化二聚作用形成的靛蓝染料，它使具Gus活性的部位或位点呈现蓝色，用肉眼或在显微镜下可看到，且在一定程度下根据染色深浅可反映出Gus活性。因此利用该方法可观察到外源基因在特定器官、组织，甚至单个细胞内的表达情况。 gus基因转拟南芥的GUS检测结果 Gus染色 将拟南芥的幼苗或成年植株的组织浸泡于染色缓冲液中，置于真空罐中0.5Mbar抽真空10 min，使染液充分渗入到组织的内部，然后置于37 ℃浸泡过夜。移去染液，用0.1 mol/L的磷酸缓冲液(pH7.0)冲洗2-3次。再用70%的乙醇脱色，更换乙醇2-3次，记录并拍照。 侵染后的烟草叶片和注射烟草叶片也用同样的方法处理 瞬时表达与稳定表达 W38侵染叶片 NB侵染叶片 NB侵染下胚轴 NB注射叶片 拟南芥1 拟南芥2 拟南芥3 拟南芥4 拟南芥5 瞬时表达 稳定表达 实验报告 实验目的 实验原理（简略写） 实验方法 实验结果及分析（最重要） 思考题（最后一次课给） 切勿相互抄袭，支持原创，如有雷同后果自负！