当归挥发油对血管紧张素Ⅱ所致心肌细胞肥大CaN通路及T通道的影响-中西医结合临床(心血管内科)专业论文.docx

万方数据 万方数据 目录 中 文 摘 要 1 ABSTRACT 3 缩 略 词 5 前言 6 立题依据 7 ⒈现代医学研究 7 1.1 中药的钙通道作用 7 1.2 有效成分及复方的钙通道作用 7 1.3 高血压左心室肥厚的研究进展 11 1.4 高血压左心室肥厚的中医研究 13 实验一 心肌细胞的传代培养及肥大模型的建立 16 1.1 材料 16 1.1.1 细胞与试剂 16 1.1.2 仪器 17 1.2 方法 17 1.2.1 H9c2 心肌细胞培养 17 1.2.2 心肌细胞生长曲线的绘制 18 1.2.3 心肌细胞形态学观察 19 1.2.4 MTT 法确定药物剂量 19 1.2.5 统计学分析 20 1.3 结果 20 1.3.1 乳鼠心肌细胞的原代培养 20 1.3.2 心肌细胞生长曲线(图 1-2)。 20 1.3.3 MTT 法测定心肌细胞细胞活性 20 1.3.4 血管紧张素Ⅱ对心肌细胞的促肥大效应 20 1.4 讨论 22 1.4.1 心肌细胞的培养 22 1.4.2 心肌细胞肥大模型的建立 22 1.5 结论 23 1.6 附录(图片结果) 24 实验二 当归挥发油的超临界萃取及药物浓度的确定 27 2.1 材料 27 2.1.1 药材 27 2.1.2 仪器与试剂 27 2.2 方法 27 2.2.1 当归挥发油 CO2 超临界萃取工艺流程 27 2.2.2 心肌细胞原代培养(同实验一) 28 2.2.3 MTT 法确定当归挥发油的剂量 28 2.3 统计学分析(同实验一) 28 2.4 结果 28 2.4.1 当归挥发油成分分析结果 28 2.4.2 当归挥发油对正常心肌细胞的影响 29 2.5 讨论 30 2.6 结论 31 实验三 当归挥发油对血管紧张素Ⅱ致心肌细胞肥大的影响 32 3.1 材料 33 3.1.1 实验细胞(同实验一) 33 3.1.2 试剂 33 3.1.3 仪器 35 3.2 方法 36 3.2.1 乳鼠心肌细胞原代培养(同实验一) 36 3.2.2 肥大模型的建立和实验分组 36 3.2.3 MTT 法检测各组心肌细胞的生长抑制效应 36 3.2.4 激光共聚焦检测线粒体膜电位和细胞内钙离子浓度 37 3.2.5 蛋白印迹法检测蛋白 CaN、Cav3.1、Cav3.2、Caspase-3、 Caspase-12 的表达 38 3.2.6 流式细胞术检测细胞周期 39 3.2.7 统计学分析(同实验一) 40 3.3 结果 40 3.3.1 各组心肌细胞生长抑制效应 40 3.3.2 各组心肌细胞线粒体膜电位的变化 40 3.3.3 各组细胞内 Ca2+的变化 41 3.3.4 各组细胞周期的变化 41 3.3.5 各组 CaN、Cav3.1、Cav3.2、Caspase-3、Caspase-12 的蛋白表达 变化 42 3.4 讨论 43 3.5 结论 44 3.6 附录 45 结语 49 4.1 结论 49 4.2 问题与展望 49 参考文献 50 当归挥 当归挥发油对血管紧张素Ⅱ致心肌细胞肥大 CaN 信号通路及 T 通道影响 中 文 摘 要 目的： 观察 当归挥发油 (Angelicanaphtha ， AN) 对 血 管 紧 张 素 Ⅱ(AngiotensinⅡ, AngⅡ)诱导的肥大心肌细胞 CaN 通路及 T 型钙离子通道的影响，探讨当归挥发 油抑制 AngⅡ诱导心肌细胞肥大的作用及其机制。 方法： 选择 H9c2 心肌细胞株，将细胞浓度调整到 1×106cells/mL，37℃、5%CO2 培养箱中培养 72h。用 10-4 mg·L-1 血管紧张素Ⅱ作用于心肌细胞 24h 成功建立心 肌细胞肥大模型。应用超临界萃取装置提取当归挥发油。实验分为 5 组：空白对 照组；模型组；低剂量(5mg·L-1)组、中剂量(10mg·L-1)组、高剂量(20mg·L-1)组。 MTT 法检测心肌细胞活力的改变；激光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位和细胞 内钙离子浓度，用试剂盒检测的活性及表达变化、用 western blot 检测 CaN 蛋白、 T 型钙离子通道相关基因蛋白 Cav3.1(CACNA1G)、Cav3.2(CACNA1H)以及凋亡 蛋白 caspase-3、caspase-12 的表达情况。 结果： 1.MTT 法检测心肌细胞存活率：血管紧张素Ⅱ造模后心肌细胞存活率明显 增加，与对照组比较，差异有显著性(P＜0.05)。与血管紧张素Ⅱ组相比，当归挥 发油干预组心肌细胞的细胞存活率均有所下降，差异有统计学意义(P＜0.05)。 .激光共聚焦检测细胞内钙离子浓度：与空白组相比，