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当归红芪合剂超滤膜提取物对H2O2致人脐静脉内皮细胞损伤的影响-中西医结合临床专业论文.docx

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当归红芪合剂超滤膜提取物对H2O2致人脐静脉内皮细胞损伤的影响-中西医结合临床专业论文

致谢58 在学期间的研究成果59 II 当归红 当归红芪合剂超滤膜提取物对 H2O2 致人脐静脉内皮细胞损伤的影响 PAGE PAGE 10 摘 要 目的: 观察当归红芪合剂超滤膜提取物对过氧化氢(H2O2)损伤人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)的保护作用和内皮细胞凋亡相关基因在此过程中的作用,探讨其在心脑血管疾 病治疗中的机制。 方法: 用 200μmol·L-1 H2O2 制造 HUVEC 损伤模型;按分组把不同浓度、不同分子 量(5 万分子量,10 万分子量,20 万分子量)的当归红芪合剂超滤膜提取物于损伤后加 入,分别测定细胞活力(MTT 法),观察当归红芪合剂超滤膜提取物对 H2O2 损伤内皮细胞 活性的影响;实验分正常对照组、单纯药物组、H2O2 损伤组、药物干预组,采用黄嘌呤 氧化酶法检测细胞中 SOD 活力;采用硫代巴比妥酸(TBA)法检测丙二醛(MDA)活 力;流式细胞仪技术检测细胞周期及细胞凋亡;化学法检测细胞内 Ca2+浓度及细胞培养 上清液中 NO 的浓度;应用 RT-PCR 和微阵列相结合的实验新技术―PCR Array‖ 检 测 与 内皮细胞损伤相关的分子在各组间的差异表达;RT-PCR 技术从 mRNA 水平检测各组与 凋亡相关的基因的表达;Western Blot 技术从蛋白水平检测各组凋亡相关基因的表达。 结果: 1. MTT 结果显示:100、200、300μmol·L-1 的 H2O2 分别作用 ECV-304 细胞 6h、12h、 24h、48h 后细胞活性明显下降,与正常对照组比较有显著性差异(P﹤0.05)。200μmol·L-1 的 H2O2 孵育 6h,细胞活性值为正常对照组细胞活性值的一半(LD50),细胞损伤适中。 2.不同浓度当归红芪合剂超滤膜提取物用药组与对照组之间 MTT 值有显著性差异 (P 0.05);当归红芪合剂超滤膜提取物作用 ECV-304 细胞 32h,在 1.5g/L~21.0g/L 浓度范围内有显著的促增殖作用。尤其以 6.0g/L~15.0g/L 浓度范围增殖作用达高峰。 3.H2O2+当归红芪合剂超滤膜提取物 5 万、10 万、20 万分子量 6.0g/L,与对照组比 较有显著性差异(P﹤0.05);与 H2O2 损伤组相比有显著性差异(P﹤0.05),且以 10 万分子量 6.0g/L 的增殖作用最强; 4.200μmol·L-1 H2O2 作用 ECV304 细胞 6h 后可以明显降低 SOD 的活力,提高 MDA 的含量,与正常对照组相比具有显著性差异(P﹤0.05);药物干预组与 H2O2 组相比有 显著性差异(P﹤0.05)。与正常对照组比较,H2O2 损伤组细胞内 Ca2+浓度明显上升(P ﹤0.05);与 H2O2 损伤组比较,药物干预组细胞内 Ca2+浓度明显下降(P﹤0.05)。 5.与正常对照组比较,H2O2损伤组细胞凋亡率明显增加(P﹤0.05),细胞HSP70 基因表达上调(P﹤0.05),eNOSmRNA表达下调(P﹤0.05),细胞培养上清液中NO含 量降低(P﹤0.05)。与H2O2损伤组比较,药物干预组细胞凋亡率明显降低(P﹤0.05), 细胞HSP70基因表达上调(P﹤0.05),eNOSmRNA表达上调(P﹤0.05),细胞培养上 清液中NO含量升高(P﹤0.05)。 结论: .过氧化氢可以引起内皮细胞存活率下降,其中以 200μmol·L-1 作用 6h 细胞损伤适 中。 .当归红芪合剂超滤膜提取物作用 ECV304 细胞 32h,在 1.5g/L~21.0g/L 浓度范 围内有显著的促增殖作用。尤其以 6.0g/L~15.0g/L 浓度范围增殖作用达高峰。 3.当归红芪合剂超滤膜提取物对 H2O2 损伤后的内皮细胞有保护作用, 其中以 10 万 分子量,6.0g/L 保护效果最为明显。且其保护作用可能是通过调节细胞周期参与了对 ECV304 增殖的影响。 4.当归红芪合剂超滤膜提取物对 H2O2 致内皮损伤的细胞具有保护作用,其作用是 通过提高 SOD 的活力,降低 MDA 的活力,减少细胞内 Ca2+的释放,以及减少内皮细 胞凋亡等机制来实现的。 5.当归红芪合剂超滤膜提取物对 H2O2 引起的内皮细胞损伤有拮抗作用,具有抗 H2O2 致人脐静脉内皮细胞凋亡的作用,具有促进 HSP70 基因的表达,维持正常内皮细 胞功能,上调 eNOSmRNA 表达,维持 NO 合成与分泌的作用。 关键词:超滤膜;当归;过氧化氢;红芪;人脐静脉内皮细胞 ABSTRACT Objective:To observe the protective effect of the ultra-filtration extract

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