蔗糖酶活力测定－二基水杨酸法.pptVIP

实验四;一、实验目的和要求 1、掌握酶活力测定的基本原理和方法； 2、学习酶的比活力的计算。;蔗糖酶活力单位(u)： 蔗糖酶在室温(50℃）, pH4.5的条件下，每分钟水解产生1μmol葡萄糖所需的酶量(ml)。 蔗糖酶比活力的计算： 酶的比活力——为每毫克蛋白质所具有的酶活力单位数，一般用酶活力单位/mg蛋白质表示。酶的比活力在酶学研究中用来衡量酶的纯度，对于同一种酶来说，比活力越大，酶的纯度越高。利用比活力的大小可以用来比较酶制剂中单位质量蛋白质的催化能力，是表示酶的纯度高低的一个重要指标。  比活力——酶的总活力单位数除以总蛋白mg数，即每mg蛋白所含有的酶活力单位数。 比活力＝活力单位/mg蛋白 ;三、实验材料与试剂 1、实验材料 蔗糖酶样品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ 2、实验试剂 ① 3,5－二硝基水杨酸试剂； 甲液：溶解6.9g 结晶酚于15.2ml 10％NaOH溶液中，???用水稀释至69ml,在此溶液中加6.9g亚硫酸氢钠。 乙液：称取255克酒石酸钾钠加到300ml 10%NaOH溶液中，再加入800ml 1%3,5-二硝基水杨酸溶液. 甲,乙二溶液相混合即得黄色试剂,贮于棕色瓶中备用,在室温放置7-10天以后使用。 ② 1g/L葡萄糖标准溶液(葡萄糖相对分子量198.17）； ③ 5％蔗糖溶液； ④ 0.2mol/L乙酸缓冲液，pH4.5； 四、实验器材与仪器 1、恒温水浴（25℃、100℃）； 2、可见光分光光度计、1cm玻璃比色皿； 3、试管、试管架； 4、移液管； 5、微量移液器：200μl、 1000μl；;五、实验操作方法和步骤 (一) 蔗糖酶活力的测定 1、标准曲线的制作 按下表加操作： 以还原糖（mg数）为横坐标，A520值为纵坐标，制作葡萄糖浓度－吸光值标准曲线。 ;;;六、结果分析讨论 七、注意事项 1、酶活力测定时，要控制好反应时间，各管的酶反应时间一定要一致，否则会影响整体结果。 2、加各反应试剂的体积一定要准确，否则也会影响最终结果。;下 次 实 验