益肾活血方通过miR-126VEGF-Notch信号.PDFVIP

中华危重病急救医学  2018年10月第30卷第 10期  Chin Crit Care Med，October   2018，Vol.30，No.10 · 991  · ·论著 · 益肾活血方通过miR-126/VEGF-Notch信号  通路改善肾纤维化               ， 530023   ： ， ： Email zhongjian@ DOI：10.3760/cma.j.issn.2095-4352.2018.10.018 【 】 摘要 目的  探讨益肾活血方通过调控微小RNA-126/血管内皮生长因子- Notch（miR-126/VEGF-Notch）  信号通路延缓肾纤维化发展的分子机制。方法  按照随机数字表法将90只雄性SD大鼠平均分为假手术（Sham） -1 -1 组、单侧输尿管结扎术（UUO）模型组、氯沙坦治疗组（50 mg·kg ·d ）以及高、中、低剂量益肾活血方治疗组 （25.2、12.6、6.3 mL/kg）。各治疗组于UUO制模结束当日开始灌胃给药，直至实验结束。术后7、14、21 d取大 鼠左侧肾脏，用苏木素-伊红（HE）和Masson染色于镜下观察肾组织病理学改变，并计算肾纤维化评分；用反 转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测肾组织miR-126、血管内皮生长因子A（VEGFA）、血管内皮生长因子受体2  （VEGFR-2）、Notch1的mRNA表达。结果  ① 病理结果：Sham组肾组织形态正常。UUO模型组肾小管扩张， 肾间质炎性细胞增多，术后7 d即可见肾小管间质纤维化，并随时间延长程度逐渐加重；术后各时间点肾纤维 化评分较Sham组明显增高。各治疗组肾脏肿胀程度、肾实质萎缩等均较UUO模型组有所改善；中、高剂量益 肾活血方组和氯沙坦组术后7 d肾纤维化评分即明显低于UUO模型组（分：1.00±1.00、0.91±0.58、1.01±0.58 比2.00±0.00，均P ＜0.01），而低剂量益肾活血方组肾纤维化评分与UUO模型组无明显差异。② RT-PCR结果： UUO模型组术后各时间点肾组织miR-126、VEGFA、VEGFR-2及Notch1的mRNA表达量均较Sham组明显升 高。与UUO模型组比较，中、高剂量益肾活血方组和氯沙坦组术后7 d肾组织miR-126、VEGFA、VEGFR-2及 Notch1的mRNA表达量即明显升高〔miR-126（2-ΔΔCt）：0.465±0.067、0.639±0.092、0.404±0.069 比0.132±  0.021，VEGFA（2-ΔΔCt）：0.024±0.005、0.027±0.007、0.023±0.006 比 0.014±0.006，VEGFR-2（2-ΔΔCt）：  0.021±0.007、0.023±0.008、0.019±0.007 比 0.012±0.004，Notch1（2-ΔΔCt）：0.017±0.004、0.020±0.005、 0.018±0.005 比0.007±0.004，均P ＜0.05〕，且中、高剂量益肾活血方组各指标基因表达量较氯沙坦组有一定上 升趋势（但P ＞0.05）；而低剂量益肾活血方组各指标基因表达量与UUO模型组比较差异无统计学意义。结论    中、高剂量益肾活血方可以有效拮抗肾纤维化，其机制可能是通过上调miR-126/VEGF-Notch信号通路，从而介 导肾脏微血管新生，最终改善肾微血管损伤和延缓肾纤维化进程。 【 】 微小RNA； 血管内皮生长因子； Notch信号通路； 益肾活血方； 肾纤维化 关键词 基金项目：国家自然科学基金；广西自然科学基金（2016GXNSFAA380047） Research on the intervention of Yishen Huoxue prescription to renal fibrosis through the signal regulation by