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第十一章 核糖体(ribosome) 　　核糖体 (ribosome) 是核糖核蛋白体的简称，是合成蛋白质的细胞元件，其唯一的功能就是按照mRNA的指令由氨基酸高效且精确地合成出多肽链。 第十一章 核糖体(ribosome) ? 核糖体的基本类型 ? 多聚核糖体与蛋白质的合成 第一节 核糖体的基本类型 ? 类型与组成成分 ? 核糖体蛋白质与 rRNA的功能分析 一、核糖体的基本类型与成分 ? 基本类型 ? 附着核糖体 ? 游离核糖体 ? 70S的核糖体 ? 80S的核糖体 ? 主要成分 ? r-protein: 40%，核糖体表面 　 ? rRNA: 60%，核糖体内部 Comparison of Ribosomal Components between Prokaryotes and Eukaryotes 核糖体的结构 ? 结构与功能的分析方法 ? 蛋白质合成过程中很多重要步骤与 50S 核糖体大亚单位相关 结构与功能的分析方法 ?离子交换树脂可分离纯化各种 r 蛋白； ?纯化的 r 蛋白与纯化的rRNA进行核糖体的重组装，显示核糖体中 r 蛋白与rRNA的结构关系 ?双向电泳技术可显示出 E. coli 核糖体在装配各阶段中，与rRNA结合的蛋白质的类型 ?双功能的交联剂和双向电泳分离可用于研究 r 蛋白在结构上的相互关系 ?电镜负染色与免疫标记技术结合，研究 r 蛋白在核糖体的亚单位上的定位。 ?对rRNA，特别是对16S rRNA结构的研究 ?70S核糖体的小亚单位中rRNA与全部的 r 蛋白关系的空间模型 ?同一生物中不同种类的 r 蛋白的一级结构均不相同，在免疫学上几乎没有同源性。 ?不同生物同一种类 r 蛋白之间具有很高的同源性， 并在进化上非常保守。 ?蛋白质结合到rRNA上具有先后层次性； ?核糖体的重组装是自我装配过程。 ? 16S rRNA的一级结构是非常保守的； ? 16S rRNA的二级结构具有更高的保守性： 臂环结构 (stem-loop structure) ? rRNA臂环结构的三级结构模型。 蛋白质合成过程中很多重要步骤与50S核糖体大亚单位相关 ?涉及的多数因子为G蛋白（具有GTPase活性），核糖体上与之相关位点称为GTPase相关位点。 ?最近人们成功地制备L11-rRNA复合物的晶体，获得了其空间结构高分辨率的三维图象。 ?这一结果证实了前人用各种实验所获得的种种结论。 ?提出直观、可靠而且比人们的预料更为精巧复杂和可能的作用机制，从而为揭开核糖体这一具有30多亿年历史的、古老的、高度而复杂的分子机器的运转奥秘迈出了极重要的一步。 二、核糖体蛋白质与 rRNA 的功能分析 ? 核糖体上具有一系列与蛋白质合成有关的结合位点与催化位点 ? 在蛋白质合成中肽酰转移酶的活性研究 核糖体上具有一系列与蛋白质 合成有关的结合位点与催化位点 ?与mRNA的结合位点； ?与新掺入的氨酰-tRNA的结合位点 —— 氨酰基位点，又称A位点； ?与延伸中的肽酰-tRNA的结合位点 —— 肽酰基位点，又称P位点； ?肽酰转移后与即将释放的tRNA的结合位点 —— E位点(exit site)； ?与肽酰-tRNA从A位点转移到P位点有关的转移酶（即延伸因子EF-G) 的结合位点； ?肽酰转移酶的催化位点； ?与蛋白质合成有关的其它起始因子、延伸因子和终止因子的结合位点。 在蛋白质合成中肽酰转移酶的活性研究 ? 核糖体蛋白 ? 在核糖体中rRNA是起主要作用的结构成分 ? r 蛋白质的主要功能 核糖体蛋白 ?很难确定哪一种蛋白具有催化功能： 在E. coli中核糖体蛋白突变甚至缺失对蛋白质合成并没有表现出“全”或“无”的影响。 ?多数抗蛋白质合成抑制剂的突变株，并非由于r 蛋白的基因突变而往往是 rRNA基因突变。 ?在整个进化过程中rRNA的结构比核糖体蛋白的结构具有更高的保守性。 在核糖体中rRNA是起主要作用的结构成分 ? 具有肽酰转移酶的活性； ? 为tRNA提供结合位点（A位点、P位点和E位点）； ?为多种蛋白质合成因子提供结合位点； ?在蛋白质合成起始时参与同mRNA选择性地结合以及在肽链的延伸中与mRNA结合； ?核糖体大小亚单位的结合、校正阅读(proof reading)、无意义链或框架漂移的校正、以及抗菌素的作用等都与rRNA有关。 r 蛋白质的主要功能 ?对rRNA 折叠成有功能的三维结构是十分重要的； ?在蛋白质合成中, 某些r蛋白可能对核糖体的构象起“微调”作用； ?在核糖体的结合位点上甚至可能在催化作用中, 核糖体蛋白与rRNA共同行使功能。 第二节 多聚核糖体与蛋白质的合成 ?