干细胞内毒素检测标准操作规程sop-zk-003新.doc

GMP质量管理 文件编号：SOP/ZK/003 PAGE 第 PAGE 1 页 共 NUMPAGES 4 页 英平药业 GMP文件 BZ/SMP/WJ/00100 第 PAGE 1 页 共 NUMPAGES 4 页 干细胞内毒素检测标准操作规程（SOP） 北京赛托森生物科技发展有限公司 质量管理 干细胞内毒素检测标准操作规程 文件名：干细胞内毒素检测标准操作规程 文件编号： 制定人： 日期： 年 月 日 文件类型：工作标准 审核人： 日期： 年 月 日 版 次：第一版 批准人： 日期： 年 月 日 印 数：共5份 生效日期： 年 月 日 颁发部门：质量管理 分发至： 质量副总经理、质量管理部、QC检验室、综合办公室 变更记载 修订号 修订人 批准日期 生效日期 原 因 及 目 的 1.简述 本操作程序主要参照BP 2003 Appendix XIV C. Test for bacterial endotoxins中MethodA.Gel-clot method: limit test和Method B. Gel-clot method: semi-quantitative test以及《中国药典2010版附录ⅹⅡE细菌内毒素检查法》中凝胶法，结合实验室自身条件编写而成。 2.安全注意事项 由于细菌内毒素对人体有毒害作用，且鲎试剂对人的危害作用尚不明确。因此实验过程中一定要做好防护措施。 3.检验目的 检验供试品中的的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定。 4.检验原理 本操作程序通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来定性检测或半定量检测内毒素。 5.供试品溶液的制备 某些供试品需进行复溶、稀释或在水性溶液中浸提制成供试品溶液。一般要求供试品溶液的pH 值在6.0～8.0的范围内。对于过酸、过碱或本身有缓冲能力的供试品，需调节被测溶液（或其稀释液）的pH 值，可使用酸、碱溶液或适宜的缓冲液调节pH 值。酸或碱溶液须用细菌内毒素检查用水在已去除内毒素的容器中配制。缓冲液必须经过验证不含内毒素和干扰因子。 6.供试品细菌内毒素的限值(L) 药典有明确规定的按照药典规定值，如无规定需经计算得出，具体计算方法见各药典。 7.供试品最大有效稀释倍数(MVD)和最小有效稀释浓度的确定(MVC) 最大有效稀释倍数是指在试验中供试品溶液被允许达到稀释的最大倍数( 1→MVD )，在不超过此稀释倍数的浓度下进行内毒素限值的检测。用以下公式来确定MVD，MVD=cL /λ。式中L 为供试品的细菌内毒素限值；c 为供试品溶液的浓度，当L 以EU / ml 表示时，则c为1ml / ml ，当L 以EU / mg 或EU / U 表示时，c的单位需为mg / ml 或U / ml。如供试品为注射用无菌粉末或原料药，则MVD 取1 ，可计算供试品的最小有效稀释浓度c=λ/L ；λ为在凝胶法中鲎试剂的标示灵敏度EU / ml （商品包装上有标示）。 举例：设设鲎试剂的灵敏度为0.25 EU/ml，即λ=0.25 EU/ml，英国药典规定柠檬酸的限值L为0.5 IU/mg(IU与EU等同)，由于柠檬酸为固体，则可以通过c=λ/L，确定最小有效稀释浓度，即MVC=0.25/0.5=0.5 mg/ml。 8.设备和试剂 8.1电子天平 8.2电热灭菌干燥箱，温度能达到250摄氏度 8.3恒温水浴或恒温培养箱，能满足恒温在37±1℃ 8.4涡旋混合器 8.5 无菌工作台 8.6微量加样器，200 ul 8.7去热源一次性吸头 8.8凝集管(10mm×75mm) 8.9管架 8.10锡纸 8.11鲎试剂，应具有国家主管部门的批准文号。 7.12细菌内毒素国家标准品或细菌内毒素工作标准品，除另有规定外，应使用由中国药典生物制品检定所统一发放的标准品 7.13细菌内毒素检查用水，内毒素含量应小于0.015 EU/ml 7.13细菌内毒素检查用pH缓冲溶液 注：以上试剂推荐使用 HYPERLINK /view/7614.htm \t _blank 厦门鲎试剂实验厂有限公司,湛江安度斯生物有限公司及湛江博康海洋生物公司 9.实验器皿去热源 实验所用的器皿需经处理，取出可能存在的外源性内毒素。通常玻璃器皿首先细菌，再用锡纸包裹放入250℃干燥箱中进行干热灭菌。而使用不耐热的塑料器皿，应选用表面无内毒素并且对实验无干