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第 PAGE 8 页 共 NUMPAGES 10 页 PriCells原代细胞培养技术指南 2012版 武汉原生原代生物医药科技有限公司 武汉原生原代生物医药科技有限公司 PriCells销售热线：027 PriCells技术咨询：027 基 础 篇 1、收到活细胞的第一天，怎样操作，哪几个步骤？ （1）收到细胞后，检查是否有运输问题，即原代细胞培养瓶或管是否破损，原代细胞培养液是否溢出。 （2）若没有运输问题，请75％酒精消毒后，拆下封口膜，放入细胞培养箱中静置。 （3）严格检查培养箱的参数。 （4）原代细胞静置时间一般为24小时后，细胞状态稳定后，即可开始后续操作。 （5）选用正确的原代细胞培养体系。 （6）培养的前三天，要求每日至少3－5张细胞照片。 2、收到原代细胞后，如何初步判断细胞是否良好？ （1）收到冻存的原代细胞复苏后，第2天原代细胞贴壁良好，换液；第4－5天原代细胞基本上可置80－90％（T25－Flask）。 （2）收到存活的原代细胞细胞后，需静置培养24小时，保留5－8ml原代细胞培养液；第2天换液；第4－5天原代细胞基本上可置80－90％（T25－Flask）。 3、收到存活的原代细胞瓶内的原代细胞培养液可以继续使用吗？ （1）无菌操作下吸出可以继续使用。 （2）4°C保存。 4、原代细胞培养时，瓶内少量漂浮物是什么？有漂浮物就证明存在污染吗？ （1）原代细胞培养时，会有些漂浮物。 （2）漂浮物一般是死细胞或细胞的代谢产物，原代细胞培养时有少量漂浮物，属正常情况。 （3）原代细胞培养污染时，培养液变浑浊。 武汉原生原代生物医药科技有限公司 PriCells销售热线：027 PriCells技术咨询：027 5、原代细胞培养细胞不贴壁，是否细胞死亡吗？ （1）有些原代细胞是非贴壁生长。 （2）刚收到的存活的原代细胞时，因为运输途中的颠簸，原代细胞会出现不贴壁，需静置培养24小时。 6、为什么说原代细胞培养消化步骤很关键？有哪几个要点？ 因为消化需要用到胰酶，胰酶对细胞是有伤害的。消化时要严格控制消化时间，不可以过长，一般1-2或2－3分钟（经验非常重要），观察到细胞变圆而非完全脱落，即可拍打瓶壁使其脱落，然后终止消化。 7、原代细胞培养大致几天需要换液，几天可传代？以何为标准？ （1）一般2-3天换一次液，以培养液的颜色为标准，一般变黄后就需换液。 （2）前期3-4天传一次代，后期4-6天传一次代。（前期指前三代，后期指三代后） 8、原代细胞培养过程中，从哪几个方面可以判断细胞好坏？ （1）细胞生长速度：一分二之后，3－4天可以长满，细胞状态则较好。 （2）细胞形态：形态统一，没有老化现象。 9、如何防止原代细胞在培养过程中的污染？ （1）细胞培养室非同普通实验室，最好10万级。 （2）严格的无菌操作。 （3）不要与他人混用实验试剂和工具。 （4）细胞培养箱中不要放有其他细胞培养。 武汉原生原代生物医药科技有限公司 PriCells销售热线：027 PriC