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二温式PCR在特异短核酸探针合成中的应用 () 花 生 学 报 2008 ,37 3:5,10 J ou rn al o f Pe a n ut S cie nce , Vol . 37 , No . 3 , 2008 ( ) 文章编号:10022409320080320005206 3 二温式 PC R 在特异短核酸探针合成中的应用 1 ,3 2 ,3 4 ,5 3 ,4 ,5 2 ,3 董 倩,黄国强,叶冰莹,陈由强,陈如凯 (1.福建师范大学福清分校生物与化学工程系,福建福清350300; 2.福建农林大学甘蔗综合研究所,福建福州350002;3.农业部甘蔗生理生态与遗传改良重点开放实验室, 福建福州350002;4.福建师范大学生命科学学院,福建福州350108; )5.发育与神经生物学福建省高等学校重点实验室,福建福州350108 ( ) ( ) 摘要 :经基因库序列比对确定花生白藜芦醇合酶基因 RS中的特异序列 长度约 108 bp 。以此为 模板设计分别含有 S al I 和 S ac I 酶切位点的一对上 、下游引物 ,并应用二温式 PCR 扩增得到该特 ( ) 异短片段 。将该特异片段正向连接到 pBl ue skrip t II KS + 的多克隆位点上 ,利用 T7 RN A 聚合酶 在体外转录合成地高辛标记的反义特异短核酸探针 。该特异短核酸探针的合成为后续 RS 基因在 A花生组织器官中表达的 RN A 原位杂交研究打下了基础 。 中图分类号 : S565 . 2 Q784 文献标识码 : 关键词 :二温式 PCR ;花生 ;白藜芦醇合酶 ;核酸探针 S y n t h e s i s o f S p e c i f i c a n d S h o r t R N A P r o b e s w i t h T w o 2t e m p e r a t u r e P C R 1,3 2,3 4,5 3,4,5 2,3DON G Qian , HU AN G Guo2qiang , YE Bi ng2yi ng , C H EN Yo u2qiang , C H EN Ru2kai (1 . D e p a rt m e n t o f B i ol o g y a n d C he m i s t r y , F u qi n g B r a nc h o f F u j i a n N o r m a l U ni v e rs i 2 t y , F u qi n g 350300 , C h i n a ; 2 . I ns t i t u t e o f S u g a rc a ne , F u j i a n A g r i c u l t u r a l a n d Fo res t r y U ni v e rs i t y , F u z h o u 350002 , C h i n a ; 3 . K e y L a bo r a t o r y o f S u g a rc a ne Eco2 P h y s i ol o g y Ge net i c I m p r ov e m e n t , M i ni s t r y o f A g r i c u l t u re , F u z h o u 350002 , C h i n a ; 4 . Col l e g e o f L i f e S ci e nces , F u j i a n N o r m a l U ni v e rs i t y , F u z h o u 350108 , C h i n a ; 5 . S t at e Ke y L abo r a2 )t o r y o f D e v el o p m e nt a l B i ol o g y a n d N e u r obi ol o g y , F u z h o u 350108 , C h i n a ( ) Abstract : T he A r ac h i s h y p o g ae a r e s ve r a t rol sy nt ha se R Sm R N A sp ecif ic f r a g me nt wa s det e r2 mi ne d b y N CB I BL A S T . Pri me r s wi t h t he t wo r e st rict io n e nzy me s of S a l I o r S ac I w e r e de si g ne d a n d t wo2t e mp e r a t u r e P C R