马铃薯脱毒苗快繁技术.DOCVIP

马铃薯脱毒苗组培快繁技术 （酒泉职业技术学院 秦晓萍 甘肃·酒泉 730500） 摘要 本论文主要从培养基的制作、脱毒苗的制取、继代培养、培养条件、瓶装苗污染控制等方面介绍了马铃薯脱毒苗快繁技术，为马铃薯快繁生产提供参考。 关键词 马铃薯 脱毒苗 快繁技术 马铃薯是我国主要的粮食、蔬菜及工业原料作物，其国民经济意义十分重要，在保证粮食安全生产方面发挥了重大作用。随着农业产业结构的调整，我国马铃薯的种植面积和总产量也在不断的增加。但在连年的栽培过程中，病毒或类病毒不断的侵染和积累，从而导致马铃薯种性变劣，长势逐步减弱，产量逐年降低。马铃薯快繁是在短时间内利用组织培养技术获得大量高质量的试管苗，应用种薯脱毒技术，培养无毒组培苗，在提高产量、保证品质、耐贮藏方面体现出了独特的优势[1]。 1 培养基的制作 1.1培养基的配方 利用提供的母液和材料MS+0.01mg/L NAA+3%蔗糖+0.56%的琼脂，PH为5.8，配置培养基1000ml,并均匀分装到24个培养瓶，进行灭菌。 母液 浓度/扩大倍数 配置体积（ml） 母液吸取量（ml） 称取量（g） 大量元素 20 1000 50 — 钙盐母液 20 50 — 磷酸盐溶液 20 50 — 铁盐 100 10 — 微量元素 100 10 — 有机物 100 10 — 萘乙酸（NAA） 0.1mg/L 0.1 — 蔗糖 3% — 30 琼脂粉 0.56% — 5.6 1.2 培养基的配制 1.2.1仪器、用具与试剂 （1）仪器：PH试纸、电磁炉、高压灭菌锅 （2）用具：移液抢、移液管、量筒、容量瓶、培养瓶、玻璃棒、洗瓶、烧杯、搪瓷缸、镊子、钥匙、称量纸、胶头滴管、抹布、卷纸、标签纸、 （3）试剂：配置MS培养基的各种母液、激素母液、琼脂、蔗糖、蒸馏水、0.1mol/LHCL、0.1mol/LNaOH 1.2.2 培养基制作 （1）准备工作 将配置好的MS培养基母液从冰箱中取出，检查是否沉淀或变色，避免使用已失效的母液。 （2）移取母液 用移液管移取各种母液，在移取时冲洗移液管，移取出后加入事先准备好装有蒸馏水的烧杯中定容，然后加入熬好的培养基中。 （3）称取蔗糖、琼脂然后融化琼脂，边加热边搅拌防止糊底。直至琼脂全部融化及清撤见底，加入准备好的母液和蒸馏水。 （4）混合培养基各个成分并定容，调整PH值。用0.1mol/LNaOH或HCL液把PH值调5.8左右后，连续调三次所测定的平均值作为最后的用量值。加后一定要搅拌均匀。 1.3 培养基的分装 培养基合成后要趁热分装，1000ml的培养基要分装到24个培养瓶中每瓶约30～40ml培养基。分装时要垂直向下，不要让培养基沾到杯壁上。然后快速的盖上盖子，盖子要拧紧。 1.4灭菌操作步骤 采用高压湿热法灭菌，在高压锅内加水至水位线淹没电热丝。将封装好的培养基、接种工具及需要的蒸馏水放入锅内，盖好锅盖接通电源当压力升至0.05MPa时用镊子打开排气阀排出锅内的冷空气，关闭排气阀。当压力升至0.1MPa时温度为121℃时维持15～20min。让锅自然冷却，当压力地为0时打开锅盖取出培养基和器具。注意：经高温灭菌后，培养基的PH值会下降0.2—0.8，故调整后的PH值应高于目标PH值0.5个单位。 2 马铃薯脱毒苗的制取 2.1脱毒材料的选择 首先对进行脱毒复壮的马铃薯品种或材料进行田间株选和薯块选择。它不仅能提高脱毒效果，而且直接关系到经过脱毒后的材料能否应用。最好是在生长季节选择具有原品种优良特性（包括株型、叶形、花色、成熟期等性状）的健康植株，并做好标记；植株生长健壮，无明显的病毒性、真菌性、细菌性病害症状；单株产量和大薯率高；薯块无病斑、虫蛀和机械创伤的材料[2]。 2.2 茎尖脱毒 2.2.1 催芽及热处理 为提高脱毒效果， 脱毒材料在进行茎尖组织剥取前，应进行材料的热处理，以钝化病毒的活性，提高脱毒效果。把入选的马铃薯块茎进行打破休眠和催芽处理（采用赤霉素20mg/L浸种20min）。 2.2.2消毒、剥离 待芽萌发长至2～3cm时，选取粗壮的芽用解剖刀切下，用自来水冲洗，然后用70%酒精浸泡30～50秒，随即用5%～7%次氯酸钠溶液灭菌20min、然后用无菌水冲洗3～4次，将其放在无菌滤纸（或纱布）上吸干水分，于40倍解剖镜下进行茎尖分生组织剥离。用解剖针小心去除茎尖周围层层叶片，露出顶端圆滑的生长点，再用解剖刀切取带1～2个叶原基茎尖（0.2～0.4mm）分生组织，随即放入之前灭菌的马铃薯茎尖培养基上，以切面接触琼脂，做好标记，然后置于培养室内进行光照培养。 2.2.3 茎尖剥离培养 将接种于三角瓶中的茎尖放于培养室内培养，培养室温度25℃左右，光照强度