饥饿和饱食对肝糖原地影响实验.ppt

病原菌多基因调控机制研究 实 验 二 饥饿和饱食对小鼠肝糖原含量的影响 实验目的 学习比色法和722型分光光度计的使用方法； 学会组织中糖原的定量测定方法； 通过实验观察饥饿和饱食对肝糖原含量的影响。 实验原理 肝糖原占肝重的5%，由许多葡萄糖分子聚合而成，是动物机体内能迅速动用的糖储存形式之一。 饱食后肝糖原含量增加，饥饿则肝糖原含量逐渐降低。 本实验采用蒽酮显色法测定肝糖原含量。 肝组织置于浓碱中加热，破坏其他成分而保留肝糖原； 再用浓硫酸脱水生成糠醛衍生物； 后者与蒽酮作用而形成蓝棕色化合物，且在620 nm处具有强的吸光性。 在一定条件下，颜色的深浅与肝糖原的含量成正比，可与同法处理的标准葡萄糖溶液进行比色定量。 实验材料 小白鼠：饥饿与饱食，每两组各一只。 器材：刻度吸管、水浴锅、722型分光光度计、手术剪刀、镊子等。 试剂：0.9% NaCl；30% NaOH；葡萄糖标准溶液（0.1 mg/ml）；蒽酮显示液与浓硫酸混合液。 操作步骤 实验动物的准备 选择体重25 g的健康小白鼠，随机分成两组： （1）饥饿组：实验前严格禁食30 h（单独放置于铁丝笼中，不要用锯木屑铺垫，以免小鼠啃食而影响实验结果，只给饮水）。 （2）饱食组：正常摄食、饮水。 2. 处死动物  用颈椎脱位法处死动物，立即剖腹取出肝脏，0.9% NaCI溶液冲洗血污后，用滤纸吸干水分，准确称取饥饿鼠肝组织0.6 g，饱食鼠肝组织0.4 g（称重量不同以避免测量的吸光度值过高或过低）。 右手拉住鼠尾用力向后拉，同时左手拇指和食指用力向下压住鼠头，将脊髓与脑髓拉断，小鼠便立即死亡。 肝脏 3. 糖原提取 取15 ml大试管2支，分别编号，各加入1.5 ml的30% KOH ，将称取的饥饿和饱食小鼠肝组织分别放入上述2支试管中。置沸水浴中煮沸20 min，每隔5 min振摇试管1次。待肝组织全部溶解后取出冷却，将各管内容物分别、全部移入2只100 ml容量瓶中（用蒸馏水洗涤试管，一并收入容量瓶内），蒸馏水定容至刻度，仔细混匀。 4. 糖原测定 取试管4支编号，按下表操作: 混匀，沸水浴10 min，冷却，以空白管调零，于620 nm波长处读取吸光度。 结果与计算 X 0.5 注意事项： （1）注意保护自己，避免被强酸强碱灼伤； （2）肝脏称重准确； （3）沸水浴过程中，经常摇动试管。 思考题： （1）为什么要做饥饿和饱食处理的两组小鼠？ （2）如何避免个体差异对实验结果带来的影响？ * *