分离纯化和表征.PDFVIP

海洋芽孢杆菌 Bacillus sp. CAMT22370 所产葡萄糖氧化酶的 分离纯化与表征 聂绮倩, 莫日坚, 徐德峰, 孙力军, 王雅玲, 叶日英 (广东海洋大学 食品科技学院, 广东省水产品加工与安全重点实验室, 广东省海洋食品工程技术研究中心, 水产品深加工广东普通高等学校重点实验室, 广东 湛江 524088) 摘要: 前期筛选获得一株海洋源Bacillus sp. CAMT22370 高产葡萄糖氧化酶菌株, 本研究进一步通过 离子交换及分子筛层析使Bacillus sp. CAMT22370 葡萄糖氧化酶纯化了2.12 倍, 酶活得率32.37%, 比 活力达到8.47 U/mg, 分子质量约为50 kDa 。酶学特性研究表明, 此酶在低温下有较好的催化活性, 最 适温度为30 ℃, 超过30 ℃时酶活迅速下降, 45℃保温2 h 活力降至75%左右; 最适pH 为6.0, 在5.0 以 2+ 2+ + 2+ 下和7.0 以上时酶活迅速降低, 9.0 时损失35%; Ca 和Mn 有明显激活作用, Na 和Zn 有轻微激活作 用, K+和Mg2+对酶活无显著影响, 而Fe2+ 、Fe3+和Cu2+对酶活有明显抑制作用, 酶动力学参数 Vmax 及 Km 值分别为26.85 (μmol/(L·min))和 109.26 (μmol/(L·min)), 以上酶学特性与现有酶制剂存在明显不同, 研究结果为该葡萄糖氧化酶的开发利用奠定了初步基础。 关键词: Bacillus sp. CAMT22370; 葡萄糖氧化酶; 分离; 酶学特性 中图分类号: R332 文献标识码: A 文章编号: 1000-3096(2018)05-0068-09 DOI: 10.11759/hykx20171017001 近年来随着海洋生物技术的兴起和对海洋生物 的目标微生物是发挥葡萄糖氧化酶优良应用潜力的 资源开发意识的增强, 国内外对海洋微生物及其酶 前提[19], 而酶的分离纯化是研究酶结构、功能和工业 的研究进展迅速, 开发具有全新性质的酶已成为国 化应用的基础[20] 。本课题组前期从南海近海泥土中 际酶制剂研究的热点[1-3] 。葡萄糖氧化酶(Glucose 分离到一株高产葡萄糖氧化酶的海洋芽孢杆菌 oxidase, GOD)能高度专一性地催化β-D-葡萄糖与空 Bacillus sp. CAMT22370, 本研究进一步对所产葡萄 气中的氧反应, 使葡萄糖氧化成为葡萄糖酸和过氧 糖氧化酶进行纯化与表征, 以期为该酶的开发利用 化氢, 一方面可降低食品基质中的氧分压, 并减缓 奠定初步基础。 因葡萄糖存在而造成的褐变[4]; 另一方面过氧化氢 1 材料与方法 在过氧化氢酶的作用下产生新生态氧, 从而起到抑 1.1 主要试剂 菌或杀菌功效[5] 。基于葡萄糖氧化酶良好的生物脱 DEAE-纤维素、Sephadex G-75 (美国Pharmacia 氧、脱糖及抑菌效果, 以及良好的安全性[6], 目前已 [7, 8] [9] [10] 在面