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实验七 微生物大小和数量的测定 目的要求 1、掌握用显微镜测微尺测量微生物大小的基本原理及方法。 2、利用血球计数器，进行微生物数量的直接测定，并掌握其原理和传统方法。 实验内容一利用显微镜测微尺测量微生物大小 显微镜成像原理 经过显微镜物镜和目镜的二级放大，形成肉眼可见的放大的物像（虚像） 构造及原理 目镜测微尺——安装于显微镜的目镜部位； 镜台测微尺——校正时放置于显微镜的载物台上（样品处），测量时不需要； 利用镜台测微尺（已知刻度长度）校正目镜测微尺在不同物镜下代表的实际长度（μm） 利用镜台测微尺校正目镜测微尺 显微镜测微尺的组成 目镜测微尺——肉眼可见物像为一级放大（7种，根据测定的材料不同进行选择）。 镜台测微尺——肉眼可见物像为二级放大，和观察样品处于同一焦面。 不可能利用真正的尺子来进行测量（微小）； 不可能制成（或制作成本过高） 不可能和所观察样品同时使用 只能用虚拟的尺子进行测量（物像）。 标定 镜台测微尺在4×物镜下的情况 镜台测微尺在10×物镜下的情况 镜台测微尺在40×物镜下的情况 目镜测微尺 镜台测微尺 4×物镜下校正示意图 目镜测微尺 镜台测微尺 10×物镜下校正示意图 目镜测微尺 镜台测微尺 40×物镜下校正示意图 目镜测微尺 镜台测微尺 100×物镜下校正示意图 说明： 镜台测微尺刻度距离的物像随物镜的变化而变化（由小变大）； 目镜测微尺刻度距离的物像在目镜不变换的情况下，是不随物镜的变化而变化。 目镜测微尺校正（代表）尺寸随物镜放大倍数增大成反比例减小。 注意： 刻度的刻线会随物镜的放大倍数而变粗（物像）； 校正的目镜测微尺在不同物镜下代表的长度是和物镜的放大倍数成反比的； 实际校正过程中，会因加工精度和刻度的放大出现微小误差。 实验步骤 菌种： 酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae ） 1、放置目镜测微尺（已放好，或直接使用测微目镜） 2、放置镜台测微尺（1毫米被100等分，放于载物台上） 3、校正目镜测微尺（不同物镜倍数） 4、用校好的目镜微尺测定酵母菌大小（10个细胞，同时观察酵母菌形态），计算平均值 5、微生物的大小表述：宽×长（μm） 说明： 微生物（其它生物也有类似的情况）的大小是有一定范围的，实际表述为0.5~1.0×4.0~ 7.0μm（举例） 目镜测微尺校正结果 接物镜 接物镜倍数 目镜测微尺格数 镜台测微尺格数 目镜测微尺每格代表的长度（μm） 搜索物镜 低倍镜 高倍镜 油镜 接目镜放大倍数： 微生物大小测定结果 微生物细胞编号 目镜测微尺每格代表的长度（μm） 宽 长 目镜测微尺格数 计算实际宽度（μm） 目镜测微尺格数 计算实际宽度（μm） 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 平均宽、长（μm） 菌体大小范围（μm） 实验用微生物名称： 实验内容二利用血球计数板测定酵母细胞数 显微镜直接计数法是将待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上（又称计数器），于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。 国内常用的计数器有血球（血细胞）计数板、 Petroff-Hausser计菌器及Hawksley计菌器。 血球（血细胞）计数板是一块特制的载玻片，由四条槽构成三个平台；中间较宽的平台又被一短槽隔成两半，每一边的平台各刻有一个方格网，每个方格网共分为九个大方格，中间的大方格即为计数室。 血球计数板俯视图 血球计数板剖面图 不同规格血球计数板的计数室 （a）麦氏血球计数板；（b）希里格氏血球计数板 血球计数板的大方格显微照片