十二核酸的生物成.pptVIP

大肠杆菌DNA聚合酶Ⅲ全酶的结构和功能 ? ? ? ? ? ? ? ? ? 延长因子 DNA聚合酶Ⅲ 两个?亚基夹住DNA DNA聚合酶Ⅲ异二聚体 核心酶 校对 引物的结合和识别 促使核心酶二聚化 （1）α亚基：具5′ 3′端聚合酶活性（需模板和引物）； （2）ε亚基具3′ 5′端核酸外切酶的活性。校对作用，以提高保真性； （3）α、ε、θ亚基相连形成核心酶polⅢ，θ亚基起组建作用； （4）核心酶+ζ亚基后成为二聚体，称为polⅢ′； （5）polⅢ′与γ、δ亚基结合，形成polⅢ′，γ、δ亚基可增强酶与模板的结合； （6）polⅢ′′与β亚基结合形成全酶，β亚基犹如夹子，夹住DNA向前滑动，不脱离，提高持续合成能力。 大肠杆菌三种DNA聚合酶比较 DNA 聚合酶Ⅱ 分子量 每个细胞的分子统计数 5′-3 ′聚合酶作用 3′-5 ′核酸外切酶作用 5′-3 ′核酸外切酶作用 转化率 DNA 聚合酶Ⅰ 109，000 400 + + + 1 120，000 100 + + - 0 .05 400，000 10-20 + + - 50 比较项目 DNA 聚合酶III 切除引物 修复 修复 复制 功能 1999年发现聚合酶? 和?，它们涉及DNA的错误倾向修复（errooune repair） polⅠ不是DNA复制酶，理由： A、该酶合成DNA速度太慢，只是细胞内DNA复制速度的1%； B、持续合成能力较低，而细胞内DNA复制不会频繁中止； C、许多基因突变都会影响DNA复制，但都与polⅠ无关。 3、双链DNA复制的分子机制 （1）冈崎片段和半不连续复制 不连续复制：3’ →5’走向的DNA实际上是由许多5’→ 3’ 方向合成的DNA片段连接起来的。（已知DNA聚合酶的合成方向都是5’→ 3’ ） 在一个复制叉内两条链的复制方向、合成方式、复制速度是不同的。 前导链（leading strand)： 以一条链（3’ → 5’）为模板时，子代链的合成方向是5’ →3’，合成是连续的，合成速度较快。 后随链(lagging strand):以另一条亲代链（5’→ 3’）为模板时，子代链的合成方向不能按照3’ → 5’方向进行，因为迄今没有发现这样的DNA聚合酶，因此只能合成方向为5’ → 3’方向的许多DNA小片段（约1000--------2000dp，7-----10S），为1968年日本人冈崎等人发现，叫冈崎片段，然后在DNA连接酶催化下，连接起来形成一条子代链。 合成是不连续的，合成速度较慢。当一段新的冈崎片段合成后，polⅠ行使5’ → 3’核酸外切酶活性切除引物，再合成一段DNA作为替换，缺口由DAN连接酶封口。 (2)冈崎片段的RNA引物 引物的合成由引物合成酶催化完成，这些酶在模板单链DNA上识别特殊序列，合成RNA引物。它本身没有活性，需要与“引发前体”结合在一起，形成“引发体”后才有活性。引发体在复制叉上移动，识别合成的起始点，引发RNA引物的合成，该过程需ATP提供能量。 方向：以DNA为模板，5’ → 3’ 长度：几个至10个核苷酸，5′端含3个磷酸残基，3′端为游离羟基。 DNA聚合酶III ：聚合脱氧核糖核苷酸 引物消除和缺口填补：DNA聚合酶I DNA连接酶：将冈崎片段连成长链 为什么需要RNA引物、而且最后要切除？ 1、DNA聚合酶有校正功能，每引入一个核苷酸都要复查一次，无误后方继续下去，它不能从无到有合成新的链，因为在未核实前一个核苷酸处于正确配对状态时是不会进行聚合反应的； 2、RNA引物是从新开始合成的，错配的可能性大，在完成引物功能后即将它删除，而代之以高保真的DNA链。 解旋酶 DNA聚合酶III 解链酶 RNA引物 引物酶和引发体 DNA聚合酶I SSB 3′ 3′ 5′ 3′ 5′ 5′ RNA引物 （3）DNA连接酶 催化子代双链DNA中的切口处的相邻3’-OH和5’-磷酰基之间形成磷酸二酯键。但不能将两条游离的DNA单链连接起来。 同时该酶要求含有3’-OH和5’-磷酰基的DNA片段能以氢键与互补链结合。 DNA—3′—OH＋P—5′—DNA＋ATP（NAD+） DNA—3′—O—P—5′—DNA＋AMP＋PPi（NMN） E,coli连接酶 催化下的连接机制 连接酶连接切口 Mg2+ 连接酶 ATP或NAD＋ AMP+PPi或NMN+AMP A T C G P T T P P P A A C C T G A P A C P P P P OH T G G A T C G P T T P P P A A C C T G A P A C P P P T G