实验四兔抗SRBC免血清的纯化.pptVIP

实验四 兔抗SRBC免疫血清的纯化 抗血清纯化的目的是尽量除去抗血清中与目的抗体不相关的成分。 ??? 抗血清纯化的方法主要有粗提法和精制法两个过程。 粗提法主要常用硫酸铵盐析法 精制法分非特异性和特异性两种类型。 非特异性方法如葡聚糖凝胶过滤法、离子交换 层析法，其方法均系基于蛋白质分子的物理性质。 特异性方法如免疫吸附法，其方法基于抗原抗 体的特异性反应。 实验目的： 熟悉免疫血清纯化方法（盐析法）的原理 了解抗体的纯化方法（盐析法）和步骤 实验原理: 蛋白质在水溶液中的溶解度是由蛋白质周围亲水基团与水形成水化膜的程度，以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。 当用中性盐加入蛋白质溶液，中性盐对水分子的亲和力大于蛋白质，蛋白质分子周围的水化膜层减弱乃至消失。同时，中性盐加入蛋白质溶液后，由于离子强度发生改变，蛋白质表面电荷大量被中和，更加导致蛋白溶解度降低，使蛋白质分子之间聚集而沉淀。 在溶液中加入中性盐使生物大分子沉淀析出的过程称为“盐析” 常用的中性盐中最重要的是（NH4）2SO4，因为它与其他常用盐类相比有十分突出的优点： ? 溶解度大；分离效果好；不易引起变性； 价格便宜；废液不污染环