氯化钴诱导化学缺氧对N9小胶质细胞的损伤作用及-中国药理学通报.PDF

中国药理学通报　ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ　２０１３Ａｐｒ；２９（４）：５５７～６２ ·５５７· 网络出版时间：２０１３－４－１６１３：３８　网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０８６．Ｒ１３３８．０２５．ｈｔｍｌ 氯化钴诱导化学缺氧对 Ｎ９小胶质细胞的损伤作用及机制 １ ２ １ １ １ １，３ 王国红 ，毕凌云 ，李超 ，侯软玲 ，尹雅玲 ，李东亮 （１．新乡医学院生理学与神经生物学教研室，河南新乡　４５３００３；２．新乡医学院第一附属医院儿科， 河南卫辉　４５３１００；３．复旦大学医学神经生物学国家重点实验室，上海　２０００３２） ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－１９７８．２０１３．０４．０２５ 通路及分子机制具有重要意义。氯化钴（ｃｏｂａｌｔ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００１－１９７８（２０１３）０４－０５５７－０６ ｃｈｌｏｒｉｄｅ，ＣｏＣｌ）是一种化学性缺氧模拟剂，能在体 ２ 中国图书分类号：Ｒ３２９．２４；Ｒ３２９．２５；Ｒ９１６．３ 外诱导神经元样ＰＣ１２细胞、心肌细胞、内皮细胞等 摘要：目的　研究氯化钴（ＣｏＣｌ）对 Ｎ９小胶质细胞的损伤 ［２－４］ ２ 多种细胞产生缺氧性损伤 ，但氯化钴对小胶质 作用及机制。方法　不同剂量 ＣｏＣｌ处理 Ｎ９小胶质细胞 ２ 细胞的作用国内外尚未见报道。本研究采用不同剂 后，ＸＴＴ法检测细胞活力；倒置相差显微镜下观察细胞形态 量氯化钴处理 Ｎ９小胶质细胞诱导化学缺氧，观察 变化；硫代巴比妥酸（ＴＢＡ）显色法检测细胞上清液中丙二醛 细胞活力、细胞形态、培养基中丙二醛（ＭＤＡ）含量、 （ＭＤＡ）含量；Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８染色检测细胞凋亡；流式细胞术 －１ 细胞凋亡及细胞周期的变化，研究氯化钴诱导的化 检测细胞周期变化。结果　ＣｏＣｌ（５０～１０００ ｍｏｌ·Ｌ ）处 ２ μ 理２４ｈ后，细胞活力明显降低（Ｐ＜００１），且呈剂量依赖性。 学缺氧对Ｎ９小胶质细胞的损伤作用及机制，并建 细胞形态发生明显改变，部分细胞出现皱缩、破碎，细胞密度 立体外小胶质细胞的化学缺氧模型。 减小，随ＣｏＣｌ剂量增大，细胞形态损伤程度进一步恶化。 １　材料与方法 ２ ＭＤＡ含量检测结果显示，氯化钴处理后，细胞上清液中 １．１　主要试剂　四氮唑复合物（２，３ｂｉｓ（２ｍｅｔｈｏｘｙ ＭＤＡ含量明显增多（Ｐ＜００５）。Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８染色结果显 ４ｎｉｔｒｏ５ｓｕｌｆｏｐｈｅｎｙｌ）５［（ｐｈｅｎｙｌａｍｉｎｏ）ｃａｒｂｏｎｙｌ］ 示，氯化钴处理组的细胞凋亡比例较对照组明显增多（Ｐ＜ ２Ｈｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍｈｙｄｒｏｘｉｄｅ，ＸＴＴ）、硫酸酚嗪 甲酯 ００１），且比例随ＣｏＣｌ剂量增大而增多。细胞周期检测结 ２ （ｐｈｅｎａｚｉｎｅｍｅｔｈｏｓｕｌｆａｔｅ，ＰＭＳ）、ＩＭＤＭ培养基、碘化 果显示，ＣｏＣｌ可使细胞周期阻滞于Ｇ／Ｇ期。结论　ＣｏＣｌ ２ １ ０ ２ 丙啶（ＰｒｏｐｉｄｉｕｍＩｏｄｉｄｅ，ＰＩ）、ＣｏＣｌ均购自美国Ｓｉｇ ２ 可呈剂量依赖性损伤 Ｎ９小胶质细胞，机制