4 人工种子跟脱毒2012版新.pptVIP

第4章 人工种子 与植物脱毒 1 人工种子 农业生产中使用的天然种子，一般都是由种皮、胚乳和胚三部分构成。种皮通常在种子的外层起保护作用；胚乳含有大量的营养物质，是种苗萌发生长不可缺少的营养来源；胚由胚芽、胚轴、胚根和子叶构成，将来发成植株。 农业生物技术的发展，通过组织培养技术，可把植物组织的细胞培养成在形态及生理上与天然种子胚相似的胚状体，也叫作体细胞胚。这种体细胞胚有于叶、根、茎分生组织的结构。科学家把体细胞胚包埋在胶囊内形成球状结构，使其具备种子机能。所以，人工种子是一种人工制造的代替天然种子的颗粒体，可以直接播种于田间。 ※ 人工种子的概念 人工种子（artificial seeds)又称合成种子（synthetic seeds)或体细胞种子（somatic seeds)。是将植物离体培养产生的体细胚包埋在含有营养成分和保护功能的物质中，在适宜的条件下发芽出苗。 人工种子的概念首先是1978年由Murashige在第四届国际植物组织细胞培养大会上提出的。他认为随着组织培养技术的不断发展，可以用少量的外植体同步培养出众多的胚状体，这些胚状体被包埋在某种胶囊内使其具有种子的功能，可以直接用于田间播种。 ※人工种子的优点 1）培养条件可以人为控制，具有省地省工可直接在田间播种等优点。 2）在人工种子制作中，可加入营养物质、植物生长调节剂、固氮菌、杀虫剂等。 3）用于制作人工种子的体细胞胚，可利用生物反应器大规模培养，大大提高了效率。 4）一些难以得到天然种子的珍稀植物或脱毒苗、基因工程植株，均可利用人工种子技术加速用于生产。 1.1 人工种子的制作 人工种子制备包括胚状体的诱导与同步化、人工种子的包埋、人工胚乳的制作、人工种皮的制作、人工种子贮藏等步骤内容。 1.1.1 胚状体的诱导与同步化发育 不论是哪一种方式产生的胚状体，在发生和发育过程中一般是不同步的。所以在一个材料中同时可以见到各个不同发育时期的胚状体。因此，控制胚状体同步发育是人工种子制备的关键环节之一。 1）胚状体的诱导： 胚状体可从悬浮培养的单细胞得到，也可通过试管培养的愈伤组织、花粉或胚囊获得。胚状体一般在培养物的表面产生，其形状与合子胚类似，但胚状体却是无性繁殖的产物。实际操作中，一般在试管中诱导出愈伤组织，并在含生长素的培养液中悬浮培养，然后置于含生长素的发酵罐中，使细胞迅速扩增，再将细胞移入无生长素的发酵罐中诱导出大量胚状体。 2）胚状体同步化处理或分选： 胚状体的同步化是指促使所有培养的细胞或发育中的细胞团块进入同一个分裂时期。只有同步化了细胞才可能成批地产出成熟胚胎。常用的方法有： （1）化学方法：饥饿法——将培养基中的一些重要成分反复去除和添加；阻断法——在培养初期加如DNA合成抑制剂，如5-氨基脲嘧啶，阻断细胞分裂的G1期。 （2）物理方法：低温处理法、过滤筛选法、渗透压分离法、密度梯度离心法(体胚不同的发育阶段密度有差异)等到胚状体胎成熟以后，就可以进行人工种子的包埋了。其中过滤筛选法较实用、快速。 1.1.2 人工种皮制备 分内种皮和外种皮 对人工种皮的要求：具有保护胚的功能，并且无毒性、通气好、抗污染、抗压性好、不粘连、适于贮藏和运输。 内种皮常用材料：聚氧乙烯、海藻酸钠、明胶、琼脂等。 外种皮常用材料： Elvax 4260(乙烯、乙烯基乙酸和丙烯酸共聚物，1987，美国)涂膜，价高，操作复杂，效果不佳。 Tullanox和Cab-0-sil(二氧化硅化合物），以粉末状包裹在人工种子胶囊外层，操作时只需将胶囊在材料中滚动即可。 硅酮种衣，能抗真菌，渗入水蒸汽和氧气，处于试验之中。 1.1.3 人工胚乳配制 成分：无机盐混合物、碳水化合物（糖和淀粉）、蛋白质、植物生长调节剂。 糖分存在容易导致微生物感染而腐烂，所以人工胚乳中也要加入防腐剂、抗菌素、有益菌类等。 选用无毒、透气和吸水性强的木薯淀粉与1.5%海藻酸钠(1/2MS培养基配制)混合制作的胚乳可改善单一海藻酸钠人工胚乳的透气性、吸水性和发芽率，人工胚乳中加入（赤霉素 ）GA3有利于人工种子的发芽，加入CaCl2 有利于向培养物供氧，提高人工种子发芽率和耐贮藏性，加扩活性炭可改善营养固定和缓释，提高人工种子在土壤中的成苗率。 1.1.4 包埋 水凝胶法 是最常用的一种方法。即用海藻酸钠等水溶性凝胶经与钙离子进行离子交换后凝固，用于包埋单个胚状体。种子硬度由凝胶浓度与络合物离子交换时间决定。 CaCl2浓度：2.0%-2.5% 离子交换时间：20min-30min 无菌水漂洗20min 1.2 贮藏 1.2.1 贮藏条件： 4~7℃低温、