环境水军团菌调查及扩增片段长度多态性分型研究-临床检验诊断学专业论文.docxVIP

重庆医科大学硕士研究生学位论文 环境水军团菌调查及AFLP分子分型研究 摘 要 军团菌(Legionella)是一种兼性细胞内寄生菌，广泛存在于自然 界及人工水体环境中。人体吸入污染有军团菌的气溶胶，或是饮用污 染有军团菌的水，创面接触污染水源等，都有可能导致军团菌的感染。 军团菌属(Legionellace)已发现有50多个种，70多个血清型，并不断 有新的菌种从环境中分离。尽管绝大部分的军团菌感染由嗜肺军团菌 (三．pneumophila)引起，但鉴于军团菌在原虫宿主细胞内的寄生性， 所有的军团菌在适宜的条件下，都有可能以相似的方式感染人体巨噬 细胞。近年来，军团菌在西方多个国家引发大的爆发流行，日益引起人 们的重视，目前已有多个国家将军团菌病(Legionnaire disease，LD)列为 法定的传染病。然而，针对军团菌感染的疫苗目前尚未问世，军团菌 病的预防和控制，仍然以输水管道的定期清洗和消毒为主。因此，对 于人工水体及自然界中存在的军团菌进行监测，对军团菌病的预防和 控制，具有十分重要的意义。我室在参考美国CDC 2005年公布的《环 境水军团菌分离培养程序》的基础上，取得了较好的军团菌分离培养 效果，2006年8～10月间于广州市8个公园内采集了44份水样，阳性率达 61．36％。鉴于嗜肺军团菌外的其它军团菌，其种属鉴定十分困难，我 们同时采用AFLP、生化反应、血清学鉴定、菌体脂肪酸分析、16S rRNA 测序等多种手段，对于初分离的108株军团菌进行分析，结果共得到31 2  重庆医科大学硕士研究生学位论文 株不同菌株，包括20株嗜肺军团菌(￡．pneumophila)，l株橡树岭军团 菌(￡．oakridgensis)l株，菲氏军团菌(￡．feeleii)5株，l株圣海伦军团 菌(三．sainthelensi)，4株长滩军团菌。参考EWGLI公布的《嗜肺军团 菌的AFLP分型草案》1．2版，对嗜肺军团菌进行分子分型，20株嗜肺军 团可分为17个AFLP型，6-q-型别与EWGLI数据库中的AFLP分型图谱具 有可比性。由此可见，规范化的AFLP技术，有利于实验室间的资料交 流、比对，进一步的流行病学调查也更为有效和可靠。 关键词：军团菌，分类学鉴定，基因分型，扩增片段长度多态性 分析，流行病学调查  重庆医科大学硕士研究生??位论文 STUDY ON THE DlSTRlBUTIoN AND GENETICAL TYPING oF LEGIoNELLA IN ENVlRoNMENTAL Ⅵ，ATER oF GUANGZHoU CITY BY AFLP MARKERS ABSTRACT Legionellae are facultative intracellular Gram-negative bacteria that are ubiquitous inhabitants of natural and man—made water systems．From this environment，Legionellae can be transmitted to humans by inhaled infectious droplets．On the other ways，human also may be infected by directly drinking or contacting the infectious water for the injured skin or mucosa．More than 50 species and 70 sero—groups have been identified in the familly of Legionellace，however,some new species are still being detected in the envrionmental water．Most diagnostic tests are directed at the species that causes most of the reported human cases of legionellosis，L． pneumophila serogroup 1．For this reason，information on the incidence of human respiratory disease attributable to other species and serogroups of legionellae is lacking．Approximately one—half of the 50 species of legionellae hav