牛血清蛋白的提取与鉴定.pptVIP

实验目的： 1、掌握血清蛋白的提取与鉴定方法。 2、掌握电泳法，盐析法、透析法以及正确的点样方法。 3、了解设计性试验的基本构架，方便今后创新性实验的进行 实验原理 ： （会用到的几种试验方法） 1、利用蛋白质的显色反应，对牛血清蛋白进行定性染色，从而对分离的物质进行鉴定。 2、盐析：盐析一般是指溶液中加入无机盐类（本次试验就采用“饱和的硫酸铵”）而使溶解的物质（本次试验提取的是“牛血清蛋白”）析出的过程 。 实验试剂与器材： 牛血清、PBS缓冲液、饱和硫酸铵、离心机、试管、小烧杯、离心管、天平、电泳所需的物件等 操作流程： 附： PBS（磷酸盐缓冲液）：是磷酸二氢钠和磷酸氢二钠组成，其中磷酸二氢钠酸性较强。如果血液中的ph值过高的话，多余的碱就会与酸磷酸二氢钠结合生成磷酸氢二钠，反之，过酸时就会与磷酸氢二钠反应产生磷酸二氢钠，这样ph值就会稳定在一定的范围内。 * 设计性试验 牛血清蛋白的提取与鉴定 3、透析：穿过膜的选择性扩散过程。可用于分离分子量大小不同的溶质，低于膜所截留阈值分子量的物质可扩散穿过膜，高于膜截留阈值分子量的物质则被保留在半透膜的另一侧。 4、电泳：带电物质或细胞在电场中的泳动。根据大分子或颗粒的电荷、大小和形状不同，使其在通过电场中的凝胶或介质时发生分离的方法。 取小 牛血清0.5毫升、PBS液0.5毫升、饱和硫酸铵2.3毫升 充分混匀，静止20分钟，2500转/分离心10分钟。 取玻璃纸一张，折成袋形，将离心后的上清液倒入袋内，用 线扎紧上口（注意要留有空隙），放入装有自来水的小烧杯 中透析，要不断振动，每隔2分钟换一次水，共换水15次。 用两支毛细管分别将标准液及测定液点在同一张醋酸纤维素 薄膜的无光泽面上（划好点样线并作好标记），标准液点一 次，测定液点三次。 盐析 透析 点样 将点样后的膜条置于电泳槽架上，放置时无光泽面向下，点 样端置于阴极，平衡5分钟，开电源160伏60分钟，关闭电源 后用镊子将膜条取出。 将膜条直接浸于盛有氨基黑10B（萘酚蓝黑）的染料中，染2 分钟取出，立即浸于漂洗液中，分别在漂洗液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中 各漂洗5分钟，直至背景漂洗干净为止。 电泳 染色 *