真鲷虹彩病毒LAMP检测方法的建立.PDFVIP

2018年第35卷第 1 期 真鲷虹彩病毒LAMP 检测方法的建立 袁向芬，石素婷，吕继洲，吴绍强 （中国检验检疫科学研究院动物检疫研究所，北京　100176） LAMP 摘　要 ：为建立一种检测真鲷虹彩病毒的环介导等温扩增 （ ）方法，满足口岸、养殖场对该病的快速监 测的需求，本研究比对分析了GenBank 中公布的真鲷虹彩病毒基因组序列，筛选其主要衣壳蛋白MCP 基因保 守区序列，进行LAMP 引物设计，建立了真鲷虹彩病毒LAMP 检测方法。对扩增条件进行优化，确定最佳反 62 45 min 100 /μL 应条件为 ℃， 。灵敏度试验结果显示，该方法最低检测限为 拷贝 目的基因。特异性试验结果 EHNV 3 FV3 STIV 显示，该方法不与流行性造血器官坏死病毒 （ ）、蛙病毒 型 （ ）、甲鱼虹彩病毒 （ ）发生交叉 LAMP 5 反应。结果表明，本研究建立的 方法具有良好的敏感性和特异性。对 份疑似真鲷虹彩病毒感染的临床 OIE PCR 100% 样品进行检测，发现检测结果与世界动物卫生组织 （ ）推荐的 方法检测结果符合率为 。研究表 明，本方法具有灵敏度高、特异性强，以及仪器设备简单、操作便捷、结果直观等优点，非常适合作为初筛手段， 应用于养殖场、口岸等一线的疫病监测。 关键词：水生动物疫病；真鲷虹彩病毒 ；环介导等温扩增；快速检测 S852.65 A 1005-944X 2018 01-0095-05 中图分类号： 　　文献标识码 ： 　　文章编号 ： （ ） DOI 10.3969/j.issn.1005-944X.2018.01.026 ： Establishment of LAMP for Detection of Red Sea Bream Iridovirus Yuan Xiangfen ，Shi Suting，Lü Jizhou ，Wu Shaoqiang Institute of Animal Quarantine Chinese Academy of Inspection and Quarantine Beijing 100176 China （ ， ， 　 ， ） Abstract To develop a Loop-mediated isot