环糊精-毛细管区带电泳法手性分离研究苯丙氨酸对映体-生物工程专业论文.docxVIP

南京工业大学硕士学位论文摘要 南京工业大学硕士学位论文 摘要 苯丙氨酸(phenylalanine，Phe)有DL～型、L～型、D一型。其中L一苯丙氨酸是人体 8种必须氨基酸之一，人体自身不能合成，它一直是临床医药氨基酸输液和食品 添加剂的重要组成成分；而D一苯丙氨酸是生产艾滋病毒抑制剂的重要中间体， 所以苯丙氨酸的对映体拆分是必不可少的一环，而其手性分析就是首先要解决的 问题。而关于苯丙氨酸对映体较经济、简便、快速的测定方法迄今未见报道。因 此，本文以苯丙氨酸对映体为研究对象，对其分离分析方法进行了探讨。 首先利用商品化的2,6-二甲基一13一环糊精(2，6一dimethylated一13-cyclodextrin， DM一13一CD)为手性选择剂，来完成苯丙氨酸对映体的分析测定。苯丙氨酸在紫 外区有吸收，可不经衍生直接用uV检测器检测。通过对缓冲液种类、pH值及 其磷酸盐浓度、手性选择剂种类及其浓度、温度、外加电压、毛细管柱的尺寸和 材料等影响因素的探讨，确定了进行分析的最佳色谱条件如下： 毛细管材料及其规格：石英未涂层毛细管75 l-t mX40帆(有效长度为30 crn) 检测波长：^=205nm 电压：22kv 电极：正向 温度：毛细管柱温25C，样品恒温25。C 电解液：40mmol·L．1磷酸二氢钠溶液，内含60mmol·L1 2,6-二甲基一B一环糊精，用 磷酸调pH为2．2 进样方式；气压进样0．5psiX 5sec，追加注入双重纯水O．1psiX 10see，且进样出 口为电解液 两次运行之问冲洗方式：依次用双重纯水冲洗lmin。0．5retool‘L1KOH冲洗2rain， 双重纯水冲洗lmin，1％H3P04冲洗lmin，双重纯水冲洗lmin，电解液冲洗lmin 通过对方法的线性范围、准确度、精密度、检测限及定量限的测定，对上述 色谱条件进行了验证，结果如下： D一苯丙氨酸和L．苯丙氨酸的线性范围分别是O．00338—0．108139+L“(R20．9995)、 0．00354—0．11327 g-L1(R=O．9996b回收率分别在97 8％一101|l％之间和98，1％一 102．4％之间；精密度用相对标准偏差(RSD)表示分别为3．55％ffn 3．82％；检测 摘要限分别为0．001629 摘要 限分别为0．001629 rL。和O．001619·L～；定量限分别为0．003239-L。和0．003229-L～。 该法简单、快速、准确度高，在12分钟内便可完成分析，并使苯丙氨酸对 映体得到了基线分离。该法为苯丙氨酸提供了一种快速、简便的检测方法，从而 可使苯丙氨酸对映体的拆分和生产做到有的放矢。 本文又自行合成了部分甲基化B．环糊精，降低了分离分析的成本，并对自 制部分甲基化B一环糊精进行了初步鉴定，将之应用于苯丙氨酸对映体的毛细管 电泳分离和分析，得到了满意的分离效果。 自行合成的部分甲基化B．环糊精手性分离苯丙氨酸对映体的色谱条件为： 电解液：40mmol·L_l磷酸二氢钠溶液，内含80mmol-L-l自制部分甲基化B一环糊精， 用磷酸调pH为1．85 电压：20kv 其他：同商品化2，6一二甲基一B一环糊精的色谱条件 关键词：手性 高效毛细管电泳氨基酸苯丙氨酸环糊精2，6-二甲基一B一环糊精 部分甲基化0．环糊精．合成 II 南京工业大学硕士学位论文ABSTRACT 南京工业大学硕士学位论文 ABSTRACT Phenylalanine(Phe)owns DL·，D—and L—configurations，L—Phe of which is one of eight kinds of necessary amino acids that can not be synthesized by the human being．It is a furMamental component of clinical physician and pharmacist，and is the important constituent of food additive．And D—Phe is an important intermediate material of aids virueides，So the separation of phenylalanine enantiomers is necessary．Then their chiral analysis is the first question to solve．As yet，simple and fast chiral analysis method of phenylalanine has not been repo