课件：动物性食品中致病微生物和寄生虫的检验检疫.ppt

2．肉眼检查。撕去被检样品肌膜，将肌肉拉平，在良好的光线下仔细检查表面有无可疑的旋毛虫病灶（见图21-2）。未钙化的包囊呈露滴状，半透明，细针尖大小，较肌肉的色泽淡；随着包囊形成时间的增加，色泽逐步变深而为乳白色、灰白色或黄白色。若见可疑病灶时，做好记录且告知总检将可疑肉尸隔离，待压片镜检后做出处理决定 3．制片。取清洁载玻片1块放于检验台上，并尽量靠近检验者。用镊子夹住肉样顺着肌纤维方向将可疑部分剪下。如果无可疑病灶的，则顺着肌纤维方向在肉块的不同部位剪取12个麦粒大小的肉粒（2块肉样共剪取24个小肉粒）。将剪下的肉粒依次均匀地附贴于载玻片上且排成两行，每行6粒。然后，再取一清洁载玻片盖放在肉片的载玻片上，并用力适度捏住两端轻轻加压，把肉粒压成很薄的薄片，以能通过肉片标本看清下面报纸上的小字为标准。另一块膈肌按上法制作，两片压片标本为一组进行镜检 。 4．镜检。把压片标本放在低倍（4×10）显微镜下，从压片的一端第一块肉片处开始，顺肌纤维依次检查。镜检时应注意光线的强弱及检查速度，切勿漏检。 5．结果判定。 （1）没有形成包囊的幼虫，在肌纤维之间呈直杆状或逐渐蜷曲状态，但有时因标本压得太紧，可使虫体挤入压出的肌浆中。 （2）包囊形成期的旋毛虫，在淡黄色背景上，可看到发光透明的圆形或椭圆形物。包囊的内外两层主要由均质透明蛋白质和结缔组织组成，囊中央是蜷曲的虫体。成熟的包囊位于相邻肌细胞所形成的梭形肌腔内。 （3）发生机化现象的旋毛虫。虫体未形成包囊以前，包围虫体的肉芽组织逐渐增厚、变大，形成纺锤形、椭圆形或圆形的肉芽肿。被包围的虫体有的结构完整，有的破碎甚至完全消失。虫体形成包囊后的机化，其病理过程与上述相似。由于机化灶透明度较差，需用50％甘油水溶液作透明处理，即在肉粒上滴加数滴50%甘油水溶液，数分钟后，肉片变得透明，再覆盖上玻片压紧观察。 （4）钙化的旋毛虫。在包囊内可见数量不等、浓淡不均的黑色钙化物，包囊周围有大量结缔组织增生。由于钙化的不同发展过程，有时可能看到下列变化：①包囊内有不透明黑色钙盐颗粒沉着；②钙盐在包囊腔两端沉着，逐渐向包囊中间扩展；③钙盐沉积于整个包囊腔，并波及虫体，尚可见到模糊不清的虫体或虫体全部被钙盐沉着。此外，在镜检中有时也能见到由虫体开始钙化逐渐扩展到包囊的钙化过程（多数是由于虫体死亡后而引起的钙化）。发现钙化旋毛虫时，可以通过脱钙处理，滴加10%稀盐酸将钙盐溶解后，可见到虫体及其痕迹，与包囊毗邻的肌纤维变性，横纹消失。 （5）鉴别诊断。在旋毛虫检验时，往往会发现住肉孢子虫和发育不完全的囊尾蚴，虫体典型者，容易辨认，如发生钙化，死亡或溶解现象时，则容易混淆。 （二）旋毛虫集样消化法 1．实验原理。先用机械方法将受检肉样捣碎，使其呈颗粒或絮状，再用消化酶在最适温度和最佳酸碱度条件下进行生物化学消化。本实验采用快速集样消化法，即由磁棒转动带动杯中消化液旋转成旋窝，加速底物消化分解，同时比水重的有形物质随旋窝的力量向中心移动，但未消化的巨型肌组织残质则被集虫器外周粗筛阻留，而虫体或虫体包囊等细小物体随旋窝向中心移动进入集虫器；当转动停止，集虫器中的有形物质便随旋窝作用逐渐沉降于底部细筛孔漏掉，只保留虫体和包囊在筛面上供镜检。 2．实验方法、步骤和操作要领。 （1）采样。首先确定群检分组的头数，每组头数的大小可根据各地区旋毛虫病的发生情况而定，即在旋毛虫病的低发病地区采取5-10头猪为1组，而常年未检出旋毛虫的地区每组可增加到30-50头或100头。既能因地提高检验工效，又不致使旋毛虫检验流于形式。如果以10头猪为1组，其分组情况应按生产流水线上胴体编号1-10、11-20、21-30……顺序。每头猪取横膈膜肌脚2g，每组10头样肉，共20g，依次放在序号相同的采样盘或塑料袋内送检。 （2）捣碎。按采样盘顺序，每次取1组（20g），置捣碎机容器中，加入0.04%胃蛋白酶溶液100ml（按每10g样肉加50ml酶溶液的比例），徐徐启动捣碎机，转速由8000rpm逐渐到16000rpm。捣碎约30s至肉样成颗粒或絮状，并混悬于混浊的消化液中。 （3）加热、消化、集虫。取下容器将捣碎液倒入500ml烧杯中，加入2%的热盐酸溶液100ml（与酶溶液等量），使温度保待在45℃左右。然后将集虫器从液面上小心压入杯中，加人磁棒，将烧杯放在加热磁力搅拌器上，启动转速节柄，消化液被搅成一旋窝。在45℃左右搅拌3-5min后，回转调节柄，停止搅拌，待磁棒静止后取出磁棒。取出集虫器，卸下集虫筛，用适量清水将筛面物充分洗入表面皿中。 （4）镜检。将表面皿移于镜检台的圆孔上，旋转圆盘使表面皿中心底部接物镜头下，将表面皿前后、左右晃动数次，使有形成分集中于皿底中心，用40倍物镜检查有无旋毛虫虫体、包囊以及虫体碎片或空包囊