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第四章 动物细胞培养制药工艺 4.1 制药动物细胞 4.2 动物细胞的生产特征 4.3 动物细胞培养基制备 4.4 动物细胞培养技术 4.5 重组人红细胞生成素的生产工艺 细胞培养制药工艺 细胞系 细胞培养制药工艺 4.1 制药动物细胞 4.1 制药动物细胞 动物细胞的结构与功能 制药动物细胞的种类 生产用细胞系 细胞培养制药工艺 细胞系 细胞培养制药工艺 4.1.1 动物细胞的结构与功能 4.1.1 动物细胞的结构与功能 1. 形态特征 细胞膜 细胞质 细胞核 没有细胞壁 亚细胞器 细胞培养制药工艺 细胞系 细胞培养制药工艺 2、动物细胞培养的代谢特征 2、动物细胞培养的代谢特征 葡萄糖和谷氨酰氨：能量和合成代谢的前体。 葡萄糖和谷氨酰氨：能量和合成代谢的前体。 葡萄糖限制:通过增加谷氨酰氨消耗得以补偿，反之 葡萄糖限制:通过增加谷氨酰氨消耗得以补偿，反之 亦然。 亦然。 葡萄糖代谢：糖酵解为主，生成丙酮酸和乳酸，乳酸 葡萄糖代谢：糖酵解为主，生成丙酮酸和乳酸，乳酸 分泌到胞外并在培养液中积累。另一条途径为TCA循 分泌到胞外并在培养液中积累。另一条途径为TCA循 环，彻底氧化产生CO 和水。一小部分为戊糖磷酸途 环，彻底氧化产生CO2 和水。一小部分为戊糖磷酸途 2 径，生成4 、5、7碳糖和NADPH 。 径，生成4 、5、7碳糖和NADPH 。 中间产物进入脂肪酸代谢、核酸代谢和氨基酸代谢。 中间产物进入脂肪酸代谢、核酸代谢和氨基酸代谢。 葡萄糖代谢旺盛，产生大量乳酸，对细胞有毒性。 葡萄糖代谢旺盛，产生大量乳酸，对细胞有毒性。 细胞培养制药工艺 细胞系 细胞培养制药工艺 Gln代谢：脱氨、转氨等作用，合成其他必需和非必需 Gln代谢：脱氨、转氨等作用，合成其他必需和非必需 氨基酸。 氨基酸。 Gln氮源，Gln受限，增加其他氨基酸消耗以补偿。 Gln氮源，Gln受限，增加其他氨基酸消耗以补偿。 离体动物细胞系，转氨作用是主要代谢途径。谷氨酰 离体动物细胞系，转氨作用是主要代谢途径。谷氨酰 胺在脱氨酶的催化下，脱氨产生氨，对细胞有毒性。 胺在脱氨酶的催化下，脱氨产生氨，对细胞有毒性。 谷氨酰氨与丙酮酸发生转氨作用，生成丙氨酸，进入 谷氨酰氨与丙酮酸发生转氨作用，生成丙氨酸，进入 培养液并积累。 培养液并积累。 Gln能量:Glu转化为 α-酮戊二酸，进入TCA循环。 Gln能量:Glu转化为 α-酮戊二酸，进入TCA循环。 流加葡萄糖或谷氨酰氨，控制整个代谢过程，避免有 流加葡萄糖或谷氨酰氨，控制整个代谢过程，避免有 毒废物的积累。 毒废物的积累。 细胞培养制药工艺 细胞系 细胞培养制药工艺 3、蛋白质糖基化与分泌表达 3、蛋白质糖基化与分泌表达 蛋白质合成场所：粗糙内质网上的核糖体 蛋白质合成场所：粗糙内质网上的核糖体 糖基化场所：内质网合成各种糖类，粗糙内质 糖基化场所：内质网合成各种糖类，粗糙内质 网腔内和高尔基体，加工修饰。 网腔内和高尔基体，加工修饰。 不同细胞系糖基化特征不同，选择适宜细胞 不同细胞系糖基化特征不同，选择适宜细胞 系。 系。 对于分泌型蛋白，分泌泡与细胞膜融合，释放 对于分泌型蛋白，分泌泡