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fish实验标准操作程序(fish实验资料一)新
FISH 实验标准操作程序
(成都新基因格实验室内部完整版)
一 实验目的
通过荧光原位杂交实验,辅助临床医疗诊断:
提高优生优育(产前诊断中的应用)、
提前预防及治疗病患(产后诊断及膀胱癌诊断等)、
对肿瘤确诊病人评估预后及中位生存期、无病痛生存期(Dsease-Free Srvival,DFS),指导
用药及治疗方案(针对乳腺癌、胃癌患者的 HER-2 基因诊断,针对 CML 患者的 bcr/abl 融
合基因诊断等)。
二 实验原理
利用DNA碱基对的互补性,将直接标记了荧光的单链DNA(探针)和与其互补的目标样本
的DNA(玻片上的标本)杂交,通过观察荧光信号在染色体上的位置反映相应染色体的情况
三 仪器设备及耗材
(一) 仪器设备:
①:全自动分子杂交仪
②:荧光显微镜及分析软件
③:恒温水浴箱 3 个以上(小型号)
④:冰箱 2 台(提供试剂和标本存放, 4 摄氏度和-20 摄氏度)
⑤:离心机(用于羊水标本以及血液标本,绒毛标本处理过程的离心)
⑥:通风橱(配固定液,等操作)
⑦:迷你离心机(探针,缓冲液的离心。可离 1.5ml 管、0.2ml 管)
⑧:考普林瓶 15 个(FISH 实验中盛放各种试剂,溶液)
⑨:移液枪(5ml,1000ul,200ul,10ul)放于杂交室和制备室。
10 :震荡混匀器
11 :计时器,温度计,温度湿度显示器。
12 :载玻片盒(用于存放已经FISH 实验后的 FISH 片子)
13 :洗耳球,吸量管(10ml),烧杯,容量瓶,电子天平,常用天平称。
(二) 耗材:载玻片(最好,带磨砂的,写用铅笔患者编号,因为不带磨砂的贴标签会被
乙醇洗掉。)
大盖玻片(方形,用于镜检)
小盖玻片(方形或圆形,圆形佳,用于分子杂交时候封片)
离心管(10ml,1.5ml,200ul )
3ml 一次性吸管
个人防护用品,标签纸等。
四 实验样本及试剂
样本:外周血,骨髓血,羊水,尿液,病理组织切片等。
试剂:4%NaOH液、0.1%NP-40、20XSSC、2XSSC、0.075M Kcl、1M Hcl、PBS 缓冲液、0.08mg/ml
胃蛋白酶工作液、200ug/ml蛋白酶 K工作液、检测试剂盒等。
(二)各种溶液的配制
2.1:制NaOH 溶液
a) 用天平称取4 克分析纯的NaOH固体,置于一只三角烧瓶中。
b) 用200ml量筒准确取100ml蒸馏水,缓缓注入盛放NaOH固体的三角烧瓶中。
c) 摇荡三角烧瓶使NaOH固体充分溶解。
d) 然后缓缓倾倒入250ml广口瓶中,密封保存备用。
2.2:配制 20XSSC溶液:
取氯化钠175.5g和柠檬酸三钠88.2g,加入1000ml双蒸水中,用磁力搅拌棒搅拌,使其
完全溶解,用滤纸过滤,调pH为5.3,封口膜封好,4℃保存备用,有效期 6个月。
2.3:配制 2XSSC溶液:
用 20×SSC 和双蒸水,按 1:9 的比例稀释,调 pH 为 7.0, 封口膜封好,4℃保存备用,
有效期6个月。
2.4:2×SSC/0.1%NP-40配制
50ml 20×SSC(pH 5.3)
0.5ml NP-40
449.5ml 双蒸水
500ml
调pH 为7.0 ,封口膜封好,室温保存备用,有效期6个月。
2.5:系列酒精的配制
取无水乙醇28ml和34ml,分别与12ml和6ml双蒸水混合,配成 70%和8
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