Bmi1参与K52ADR细胞多药耐药的机制研究.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 目 目 录 一、摘要 ．．1 (一)中文摘要 ． ．．．．． ．．．．． ． ．．． ． 1 (二)英文摘要． ．．．． ． ． ． ． ． ． ．．3 二、正文 5 (二)材料与方法．．． ． ．．．．．．．． ．一． ．．．6 (三)结果．．．．． ．．．．．．．． ． ．．．．．．． ．．．．1 7 (四)讨论 ．．． ． ．．．．．．．．．．．．．．．．． ．23 (五)结论．．． ．．．．．．．．．．．．．． ．．．． ． ．．．．．．26 (六)参考文献．．． ． ． ．．．．． ．．． ．．．27 三、综述 ．．32 (一)综述． ． ． ． ．． ．．．． ．32 (二)参考文献 ．．．．．． ．． ．． ．．．．． ．38 四、致谢 ．43 万方数据 大连医科大学硕士学位论文Bm 大连医科大学硕士学位论文 Bm i-1参与K562／ADR细胞多药耐药的机制研究 硕士生姓名：刘思琪 指导教师：孟秀香教授 专业名称：临床检验诊断学 摘要 背景：慢性髓细胞白血病(chronicmyelogenous leukemia)是来自骨髓多能干 细胞异常克隆的恶性血液病；目前化学治疗是CML慢性期的主要治疗手段。然而， 导致化疗失败和复发的主要因素之一是白血病细胞出现多药耐药性(multidrug resistant)。其中MDRl基因／P一糖蛋白(P—gP)是白血病MDR的研究领域中一 个非常流行的重要课题。Bmi—I(B—cell—specific Moloney murine leukemia virus insertion site 1)是多梳基因家族(Polycomb Group genes，PcG)的关键成员之一。 Bmi一1作为一种原癌基因与各种癌症的发生和进展有非常紧密的关联，包括恶性血 液病。然而，关于Bmi．1与白血病多药耐药现象相关方面传导通路及具体生物学 机制仍不明确。因此，本次实验内容把CML的多药耐药细胞系K562／ADR作为主 要研究对象，探究Bmi一1是否参与到CML的多药耐药中，并且希望进一步探讨这 一现象的可能生物学机制。 方法：1、利用慢粒的多药耐药细胞株K562／ADR，使用RNA干扰方法即使 用实验室已构建好的两种序ytJd,干扰RNA瞬时转染K562／ADR细胞48小时(A—S1， A—S3)，干扰Bmi一1基因的表达。2、沉默Bmi．1基因的表达后检测PTEN，P—AKT, NF—KB细胞浆及细胞核P65(NF—rd3 P65 in nuclear and P65 in cytoplasm)，P．gP的 蛋白表达及MDRl／P．gP的功能改变。3、应用NF—vd3抑制剂PDTC，80pmol／1处 理K562／ADR细胞24小时，抑制NF—rd3后，检查P—gp的蛋白表达及其功能变化。 4、应用P13K／AKT通路抑制剂LY294002，20I，tmol／1处理K562／ADR细胞24小时， 抑制P—AKT后，检测NF—vd3胞浆及胞核P65与P—91)的蛋白表达。5、沉默Bmi一1 基因后使用PTEN抑制剂BPV(phen)，80nmol／1处理细胞4小时，检测P—AKT， NF—vd3细胞浆及细胞核P65蛋白与P—gp的表达。 使用倒置荧光显微镜观测 万方数据 大连医科大学硕士学位论文K562 大连医科大学硕士学位论文 K562／ADR细胞转染控制组(A—C)质粒的效率。Bmi一1和MDRl基因mRNA的 表达通过RT-PCR进行分析。不同组别的各种蛋白表达水平经过Western Blot实验 测定。MDRl／P—gP的药物泵出功能应用流式细胞分析仪进行检测。 结果：1、两种小干扰RNA敲除Bmi一1基因的表达后，都能够抑制NF—vd3信 号通路(P65 in cytoplasm升高，P65 in nuclear降低)以及降低MDRl／P—gP的表达。 Bmi．1．RNA干扰，增加了阿霉素在K562／ADR中的积聚即说明抑制了MDRl／P—gP 药物泵出功能。2、NF—vd3的活性和P—gP的蛋白表达及MDRl／P—gP药物泵出功能 在使用NF—r．B抑制剂(PDTC)后被抑制。3、敲除Bmi一1基因后，增加了PTEN 的表达，抑制了磷酸化AKT。4、丝氨酸473位点p-AKT和NF—KB．P65在细胞核 的表达量，以及P糖蛋白的表达在应用P13K／AKT途径抑制剂LY294002时表现出 显著减少。5、在K562／ADR—Bmi．1一siRNA细胞中应用PTEN抑制剂BPV(phen) 处理时， NF—vd3的活性及P—gP的表达得到重塑。 结论：1、B