B7H4在肺部和结直肠癌组织中的表达及同肿瘤患者可溶性B7H4的检测.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 广东医学院 硕士学位论文 B7-H4在肺部和结直肠癌组织中的表达及不同肿瘤患者可溶性 B7-H4的检测 姓名：胡国艳 申请学位级别：硕士 专业：@ 指导教师：徐军发 200905 盯一H4 盯一H4在肺癌和结直肠癌组织中的表达及肿瘤患者可溶性 盯一H4的检测 中文摘要 【目的】 B7．H4(B7Sl、B7x)是最近发现的B7家族成员，能通过抑制T细胞的增殖、 细胞因子的产生和细胞周期的进程来负性调控T细胞的免疫应答，其在多种肿 瘤组织中的高表达，提示其在肿瘤的发生发展中的作用，并被认为是某些肿瘤的 新型肿瘤标志物。 本文采用免疫组织化学法检测部分肺癌及结直肠癌组织B7．H4的表达，采 用重组小鼠B7．H4(ⅡlB7．H4)蛋白作为抗原制备兔抗小鼠B7．H4多克隆抗体，并 建立检测人可溶性B7．H4(soluble B7．H4，sB7．H4)的ELISA夹心法，并对部分肿 瘤患者血清sB7．H4水平进行检测，以探讨sB7．H4的检测对肿瘤的诊断及预后 的意义，并为研究B7．H4在肿瘤发生、发展中的作用奠定基础。 【方法】 1．肺癌和结直肠癌患者肿瘤组织中B7．H4的表达 采用抗人B7．H4单克隆抗体作为一抗，借助免疫组织化学法检测20例肺 癌和20例结直肠癌患者肿瘤组织中B7．H4的表达。 2． 兔抗小鼠B7．H4多克隆抗体的制备及鉴定 用纯化的重组小鼠B7．H4蛋白作为抗原，免疫家兔，制备兔抗小鼠B7．H4 多克隆抗体，并对其特异性及纯度进行鉴定。 3． sB7．H4 ELISA检测方法的建立 以抗人B7一H4单克隆抗体做为包被抗体，纯化的重组小鼠B7．H4作为参考 标准品，兔抗小鼠B7．H4多克隆抗体作为捕获抗体，HI冲标记羊抗兔IgG作为 二抗，建立检测可溶性B7．H4的ELISA夹心法。 4． 肿瘤患者血清sB7．H4的检测 用建立的检测sB7 用建立的检测sB7．H4的ELISA法对630例不同种肿瘤患者血清sB7．H4水 平进行检测，并以正常体检者血清sB7．H4水平作为对照，分析肿瘤患者与正常 体检者血清sB7．H4浓度的差异。 【结果】 1．肺癌和结直肠癌患者肿瘤组织中B7．H4的表达 通过免疫组织化学法检测20例肺癌和20例结直肠癌肿瘤组织B7．H4的表 达，结果显示B7．H4在肺癌和结直肠癌肿瘤组织中高表达，提示B7．H4可能在 肿瘤的发生、发展中起重要作用。 2．兔抗小鼠B7．H4多克隆抗体的制备及鉴定 成功制各了兔抗小鼠B7．H4多克隆抗体，经过半饱和硫酸铵初步纯化后， 其ELISA效价为1：12800，多克隆抗体除与重组小鼠B7．H4蛋白结合外，还能结 合人肿瘤组织中的B7．H4，其纯度及特异性均达到后续试验要求。 3．可溶性B7．H4 ELISA检测方法的建立 成功建立了sB7．H4 ELISA检测方法，检测范围在3．13肛∥L～20叽∥L之间， 批内重复性试验和批间重复性试验的变异系数分别为7．92％和11．1％，平均回收 率达到了90．1％，说明该方法的准确度和精密度都较好。 4．肿瘤患者血清B7．H4的检测 用以上建立的方法对630例不同种肿瘤患者血清sB7．H4水平进行了检测， 结果显示肝癌、胃癌、结直肠癌、食管癌、肺癌、鼻咽癌、乳腺癌、宫颈癌、卵 巢癌、恶性淋巴瘤患者血清sB7．H4含量均高于正常对照，而子宫肌瘤、白血病、 多发性骨髓瘤患者血清sB7．H4与正常对照无差异。 【结论】 证实了B7一H4在肺癌及肠癌组织中高表达，其表达程度与肿瘤的病例分型 和患者的临床分期相关；成功制备了兔抗小鼠B7．H4多克隆抗体，建立了检测 sB7．H4的ELISA夹心法；初步证实了sB7．H4在多种肿瘤患者血清中含量增高。 提示B7．H4有望作为一种肿瘤标志物，但有关B7．H4在肿瘤的发生发展中的作 2 用机制尚需进一步探讨。【关键词】 用机制尚需进一步探讨。 【关键词】B7．H4；共抑制分子；抗体制备；ELISA夹心法；肿瘤； 肺癌；结直肠癌 【中图分类号】I也92．33 R446．61 R730．43 【文献标识码】A Ab Ab stract 【Objec蜥e】 B7-H4 is a rec耐ly id蛐tijfied B7缸lily menlber tllat nega；tiVely re则at销T翻1 ilIlIl删叭y tlle illllibition ofT cell proli缸ation，cytol【ine produCtion，觚d翻l cycle prog聪ssion．B7-H4 protein is consist饥tly oV懈唧ed ill most tu加．0瑙which suggestedⅡlat B7-H4 could b